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要根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列，设计一条基因特异性引物,与通用引物并用，一步PCR成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 3′末端。与常规的3′RACE法相比，一步PCR法具有快速、简便、经济等优点，是一种非常快捷的扩增cDNA 3′末端序列的方法。
可直接克隆PCR产物的克隆载体的构建
PCR产物 克隆载体 pUC118 大肠杆菌JM109
2008/1/3
本文描述一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法。以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体，在pUC118质粒氨苄抗性基因的Eam1105 I 酶切位点上，以点突变的方式封闭Eam1105 I 酶切位点。经转化大肠杆菌JM109证实，该改造过的pUC118质粒，可使宿主细胞仍具有氨苄抗性。将一人工合成的具有两个Eam1105 I 酶切位点的互补寡聚核苷酸链（两端具有BamH I 接头）插入已封闭...
为研究D7S21基因座在河北汉族人群分布的多态性,应用MVR-PCR ( Minisatellite Variant Repeat-Polymerase Chain Reaction)方法和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳银染法对124名河北汉人无关个体D7S21基因座进行了快速检测，并进行数字编码。每一个体平均得到36个数字编码，未发现任何两个无关个体所有编码相同，两无关个体36个编码相同的概率为3.48...
采用PCR检测方法从饲料的主要原料豆粕、玉米蛋白粉中成功地检出启动子35S (35S-promoter,originated from cauliflower mosaic virus)、终止子NOS (nopaline synthase-terminator,derived from Agrobacterium tumefaciens)、耐除草剂基因EPSPS(5-enolpyruvylshik...
用于聚合酶链式反应(PCR)引物设计的计算机程序
聚合酶链式反应 引物对 引物设计
2008/1/3
摘要 本文报道了两个用于PCR引物设计的计算机程序PCRDESN和PCRDESNA。PCRDESN程序主要从以下4个方面评价用户自己设计的一对引物的质量:(1)引物内的碱基反向重复或发夹结构,(2)两个引物之间的碱基互补配对,(3)两个引物之间的同源性,(4)引物的碱基组成及特点和T_m值计算。通过用多例文献发表的及本院有关实验室提供的引物对序列的验证,确定了程序的运算参数,证明该程序能较好地检验...
用一种新型的PCR方法快速制备人TNF-α缺失突变体
人肿瘤坏死因子-α 缺失突变体 PCR
2008/1/3
摘要 人肿瘤坏死因子 α(hTNF α)的 2个Loop区 2 9～ 36、141～ 146是受体的主要结合部位 .应用一种新型的PCR方法 ,快速制备了这 2个Loop区的缺失突变体 ,并对其活性进行了研究 .结果表明 :这种新型的PCR方法在制备缺失突变体中具有快速、简便、经济等优点 ,值得推广 ;缺失蛋白对L92 9细胞的毒性作用明显降低 ,表明这 2个区域为hTNF α发挥其生物作用所必...
用衔接头PCR克隆新的胡萝卜Ⅱ型转化酶基因启动子
衔接头-PCR Ⅱ型转化酶 启动子
2008/1/3
摘要 为克隆新的胡萝卜 型转化酶基因启动子 ,将胡萝卜基因组 DNA分别用 Pvu 、Eco R 、Dra 和 Sma 酶切 ,酶切片段与一特殊的衔接头连接 .取连接产物作模板 ,以衔接头引物和基因特异引物做 PCR,得到的主要 PCR产物分别为 3.4kb、1 .3kb、0 .4kb和 0 .6kb.将 Eco R -衔接头体系的 PCR产物克隆和测序 ,并将其序列与 Gen Bank中的已知...
摘要 肿瘤细胞对化疗药物的抗性是癌症有效化疗的主要障碍。人类细胞中多药抗性基因(MDR1)编码一种p-糖蛋白,后者功能是能量依赖的跨膜药物外输泵,可降低细胞毒药物在胞内的积累。定量分析MDR1表达水平可说明病人抗药能力的高低。本文应用PCR技术建立了灵敏度高、专一性好、可定量检测临床标本中MDR1表达水平的方法。对周血标本的初步检测表明:白血病化疗效果与MDR1表达水平的高低有关。
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荧光差异显示PCR分离果蝇七氟醚敏感性相关基因
荧光mRNA差异显示PCR 七氟醚敏感性基因 果蝇
2008/1/3
摘要 吸入麻醉药是临床上常用的一类全身麻醉药 .为深入研究吸入麻醉药的作用机理 ,以本实验室创建的对七氟醚敏感的果蝇品系 (F PS1 )和耐药 (F PR1 )的果蝇品系为研究模型 ,以野生型黑腹果蝇 (Drosophilamelanogaster)为对照 ,应用荧光mRNA差异显示PCR (fluorescentdifferentialdisplayreversetranscriptional...
摘要 胰岛素样生长因子 1(IGF 1)是一种多功能的细胞增殖调控因子 ,其表达水平受多种因素的影响 ,为了研究IGF 1基因在转录水平上的调控机制 ,建立了定量测定IGF 1mRNA的竞争性PCR方法 .同时 ,也建立了一种简便的制备同源性竞争模板的方法 .以构建好的重组pUC IGF 1质粒为基础 ,利用IGF 1mRNA序列上唯一存在 ,但是在pUC18质粒上多拷贝的MspⅠ酶切位点 ,以该...
摘要 为建立一种比现有方法敏感、准确性高、重复性好的结核分枝杆菌DNA定性定量检测方法 ,以TaqMan探针技术为基础 ,运用TaqMan MGB探针 ,实时检测临床标本中的结核分枝杆菌DNA .用来自临床标本的DNA及克隆于载体的IS6 1 1 0序列检测所建立方法的有效性 .结果显示 ,所建立方法的最低检测限度为 1个基因拷贝 反应 ,在每反应 1 0 0 ～ 1 0 8拷贝范围内 ,Ct ...
摘要 PCR SSCP是对未知单核苷酸多态性 (SNPs)进行检测最简便、最实用的方法之一 .该方法检测的灵敏度易受片段大小的影响 .以大小在 2 0 0bp左右的PCR扩增产物为检测对象 ,对该方法的影响因素进行了分析 .结果表明 ,在 4℃条件下 ,10V cm恒压电泳 10～ 16h ,在上样缓冲液中加入10 %甘油 ,在 12 %～ 15 %的非变性聚丙烯酰胺 (arc∶bis =2 9∶...
应用创造酶切位点法检测单碱基突变The Establishment of Method for Identifying SNP Genotype by CRS-PCR
CRS-PCR EX-FABP基因 SNP检测
2007/12/30
摘要应用引物错配技术结合单碱基突变位点而配合成一个酶切位点，使之成为可用PCR-RFLP方法分析的突变位点，是对单碱基突变位点进行基因型鉴定的有效而简捷的手段。本文以鸡胞外脂肪酸结合蛋白(Extracelluar fatty acid binding protein,EX-FABP)基因单碱基突变的基因型检测为例，探讨了应用创造酶切位点PCR（Created Restriction Site PC...
ERIC-PCR技术在李斯特氏菌种、菌株鉴定中的应用ERIC-PCR on Identification of Listeria Species and Strain
肠杆菌基因间重复一致序列 PCR 李斯特氏菌 DNA指纹图谱
2007/12/30
摘要应用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应技术（ERIC-PCR）对李斯特氏菌基因组DNA进行分析，结果显示，李斯特氏菌种间DNA指纹图谱带型差异较大；单核细胞增生性李斯特氏菌株间及相同血清型不同来源的菌株，其DNA指纹图谱带型也有明显差异。在单核细胞增生性李斯特氏菌各株的DNA指纹图谱中发现1600bp的种专一性扩增带。结果表明，ERIC-PCR技术可用于李斯特氏菌种、菌株的鉴定及进一步分型研...