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金银花ISSR-PCR反应体系的建立与优化
金银花 ISSR 反应体系 优化
2009/1/6
以金银花叶片基因组DNA为模板，通过单因素试验，研究了退火温度、Taq DNA 聚合酶的用量及模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+浓度等6种因素对ISSR－PCR扩增的影响，建立了适合于金银花ISSR-PCR反应体系和扩增程序，即在20 μL反应体系中，内含1×PCR反应缓冲液（Mg2＋free）、1.5 U Taq DNA 聚合酶、0.15 mmol·L-1 dNTPs、0.4 μmol·L-...
PCR基因体外扩增仪
基因 体外扩增仪 计算机控制 生物学仪器
2008/11/13
聚合酶链式反应(Polymersae Chain Reaction，简称PCR)。PCR基因体外扩增仪是模拟PCR反应过程，完成这种反应的自动化仪器。采用水浴加热与机械臂的工作方式，所有的操作(包括控温与机械动作)均由单片微机控制完成，形成了可靠性高和集成度高的二个技术特点。该仪器在分子生物学、医学、生物工程、法医学、考古学等许多领域具有广泛的使用价值。合作方式：开发国内外市场。
PCR产物末端性质的分析研究
PCR产物末端 UT-PCR Taq DNA聚合酶 Pwo DNA聚合酶
2008/10/15
利用PCR、UT-PCR、克隆及测序等技术，对强直性肌营养不良基因（MT-PK）3′-非翻译区分别用Taq，Taq＋Pwo DNA聚合酶进行了扩增、克隆和测序，研究了PCR产物末端组成情况，并比较了上述两种DNA聚合酶对PCR产物末端的影响.结果在用Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物主要得到3′端突出1个A（占67.3％，35/52）；在Taq＋Pwo DNA聚合酶扩增的PCR产物末端中得到3′...
差异显示反转录PCR技术研究进展
mRNA 差异显示 聚合酶链反应
2008/9/27
分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异，已成为分子生物学研究领域的热点之一.近年来，用于识别差异表达基因的方法已发展起来多种.DDRT-PCR是近年来较为广泛应用的一种技术.理论上，DDRT-PCR技术比较简单，但实施起来却存在着假阳性率高，凝胶中单条cDNA带成分不均一, 所获cDNA仅代表着mRNA 3′UT区(约300 bp)以及一些低拷贝数mRNA不能有效被呈现等问题.对DDRT-P...
分子信标探针用于PCR检测对虾白斑杆状病毒
对虾白斑杆状病毒 PCR 分子信标探针
2008/9/4
将对虾白斑杆状病毒的一段特异性DNA设计成分子信标探针，用于该病毒的PCR检测.温度与荧光强度之间的关系表明，所设计探针的发夹既可以形成也可以打开，符合PCR对分子信标探针的要求.结果表明，在PCR同时加入分子信标探针不影响PCR扩增，分子信标探针只能与目的DNA杂交，具有较高的特异性.随着PCR循环数的增加以及含目的DNA的质粒拷贝数的增加，荧光强度都随之增强.
定量RT-PCR中人干细胞因子的RNA-CRS的构建
基因表达定量 定量RT-PCR 人干细胞因子基因
2008/9/3
一种适用于定量RT-PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术，构建人干细胞因子(hSCF)基因的RNA竞争性参考标准(RNA-CRS)的新方法：用RT-PCR技术，从HepG2细胞中扩增出全长人hSCF cDNA，并克隆入质粒pGEM-T获重组的pGEMSCF载体，经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理，以导致hSCF cDNA中一小片段缺失，由此获得重组pGEMSCF...
亲和力是影响改型单链抗体应用于临床的重要因素之一.利用巨型引物PCR定点诱变方法，设计并化学合成出两组含多个突变位点的简并引物，在第一轮PCR中使用简并引物分别扩增出含突变碱基的两条特异性的DNA片段，即巨型引物，将其经琼脂糖凝胶电泳分离纯化后，作为3′和5′的两端引物应用于第二轮PCR反应中.通过改变标准PCR反应条件，调整引物与模板的浓度，扩增出特异性较强的目的DNA条带.PCR产物经回...
对3′-RACE方法进行了修改，采用一条特异性引物和一条通用Oligo dT引物成功地克隆了东亚钳蝎BmKIT3 3′cDNA末端，与常规3′-RACE方法相比，两步PCR方法具有节约成本、节省时间、增加反应特异性等优点，尤其适用于生物活性肽基因的快速克隆和鉴定.
一种检测细胞微量点突变的方法——等位基因特异的PCR
等位基因 PCR 点突变
2008/6/13
为了灵敏、方便地检测出细胞群体中含量极低的点突变，利用一β珠蛋白基因簇Gγ -202 C→G突变的杂合细胞株，优化传统的等位基因特异PCR的反应条件，以定量的PCR产物为模板，在含5%甲酰胺的体系中用半巢式的等位基因特异引物进行扩增.结果表明，该方法灵敏可靠，可快速检测到细胞群体中低于0.025%的点突变.
用差异显示反转录PCR银染技术研究植物基因表达的差异
差异显示反转录PCR 银染 拟南芥 ast突变型
2008/6/12
通过调整差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量，优化了适用于银染检测的DDRT-PCR方法.PCR扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后，银染能检测到多而清晰的条带.泳道中的条带数最少为40个，最多达80个，平均为60个，条带大小分布在100～900 bp范围，灵敏度为5 pg/mm2 .此方法操作简便快速，灵敏度...
用改进的DDRT-PCR技术进行人胚差异基因筛选
人胚胎 发育 mRNA差异显示 PCR
2008/6/12
介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速高效mRNA差异显示技术，其特点是利用Ready-To-Go RT-PCR反应珠和Ready-To-Go RAPD分析珠进行mRNA差异显示分析，使取样步骤降至最低程度，减少了潜在的取样误差和外源DNA污染，并确保每次反应的高度重复性.通过银染测序胶分析差异显示的cDNA带,便于DNA回收和进一步克隆.用此方法分析人胚发育早期不同阶段...
由于PCR影响因素多，获得理想扩增结果比较困难，有必要寻找一种简单有效的方法建立最佳扩增体系.针对Mg2+浓度、二甲基亚砜(DMSO)浓度、变性时间、延伸时间、循环次数等因素进行4因素6水平和6因素10水平均匀设计实验优化apo E基因244 bp片段的PCR扩增条件.采用纯化模板和简易模板，只需6～10次实验即可获得特异性、高产率扩增结果.研究表明，将均匀设计用于PCR条件优化以及有关的样品处理...
用一个简单快速的RT-PCR技术筛选白细胞介素-6作用相关基因
白细胞介素-6 差异表达基因 骨髓瘤细胞
2008/6/11
为了研究白细胞介素-6(IL-6)作用相关基因以及一些可能受IL-6调控的基因，利用一个简单快速的以PCR为基础的方案，检测了IL-6处理和未处理的Sko007细胞中基因表达的差异，克隆并鉴定了差异表达基因的cDNA片段.首先用6-mer寡核苷酸引物进行反转录从而最大限度地将mRNA编码区序列生成cDNA；然后用2或3个较长的随机引物进行PCR扩增，并以不同引物组合重复PCR增扩；扩增产物在2%琼...
Development of a Rapid PCR Test for Identification of Streptococcus agalactiae in Milk Samples Collected on Filter Paper Disks
Filter Paper Disk Bovine Mastitis Streptococcus agalactiae
2016/4/27
Streptococcus (Strep.) agalactiae is one of the major pathogens of bovine mastitis and is the main cause of subclinical infection. This study attempted to develop a rapid PCR diagnosis procedure using...