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RNA介导的转基因沉默:原理及应用RNA-based Transgene Silencing:Mechanism and Applications
转录后基因沉默(PTGS) 双链RNA(ds RNA) RNA指导的DNA甲基化(RdDM)
2007/12/31
摘要RNA介导的转基因沉默是有dsRNA参与指导的,以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。本文对植物中RNA介导的转基因沉默的机理做了详细的阐述,并且将各种生物中在此过程中起关键作用的蛋白及其功能进行了总结，最后介绍dsRNA作为一种基因组学研究手段的优势和它实际的应用前景。
Abstract:RNA-based transgene silencing is a phenomenon ...
RNA干涉及其应用前景RNA Interference and Its Promising Future
RNA干涉 小干涉RNA 转录后基因沉默 Dicer酶 RdRP活性 功能基因组
2007/12/30
摘要RNA干涉是指由特定双链RNA(dsRNA)引起的转录后基因沉默现象。研究表明，Dicer断裂dsRNA产生的小干涉RNA可以抑制哺乳动物体细胞和胚胎中的基因的表达。 RdRP在扩增RNAi中起着关键性的作用,RdRP活性复制较长的触发性dsRNA或以一种非引物的方式复制短的siRNA，即以siRNA为引物的RdRP反应使靶mRNA转变为dsRNA，同时复制触发性dsRNA。 所有的产物又可作...
DNA指导的RNA聚合酶的研究1. 615小鼠肝RNA聚合酶B (11)的提取和鉴定
2007/12/28
摘要本文叙述了从‘15小鼠肝中提取和纯化RNA聚合酶B (11)的程序。这种酶在性质和结构上与已
报道的其他真核生物的同类酶基本一致。其DEAE一纤维素DE52洗脱部分在280 nm光吸收测定和
3H-UTP掺人活性测定都表明它是单一的峰，在不变性的聚丙烯酚胺凝胶电泳上也是一条电泳带；在变
性电泳条件下，它由11条电泳带组成，其中有两个大亚基，其分子量分别为220,000和125,000道尔...
小鼠脾细胞凋亡释放RNA与自身免疫病的相关性
细胞凋亡 脾脏 小鼠 自身免疫病
2007/12/24
摘要 在经放射线照射诱导的凋亡小鼠脾细胞培养上清中 ,可以提取到大量RNA ,用流式细胞仪检测发现凋亡细胞内的RNA量与正常细胞比较有所下降 .甲基绿 派若宁Y染色小鼠脾脏 ,脾细胞间质呈派若宁Y染色阳性 ,提示小鼠脾细胞也可能释放RNA .将小鼠脾脏研磨后 ,发现脾脏上清中也存在大量的RNA .采用小鼠脾脏上清RNA与脾脏细胞悬液总RNA的比值作为指标来衡量细胞凋亡释放的RNA量 ,并比较了B...
摘要 运用基因重组和基因转染技术 ,将 PKCα c DNA反向插入的重组质粒 p XJ41 - CKPα导入人肺癌 LTEPa- 2细胞 .经 Northern印迹 ,Western印迹等检验 ,表明成功地建立了稳定表达 PKCα反义 RNA的人肺癌细胞 (LT· AS4) .进一步研究了表达 PKCα反义 RNA对人肺癌细胞 LTEPa-2增殖的影响 .结果表明 ,表达 PKCα反义 RNA可...
γ-射线对大鼠小肠粘膜上皮细胞RNA合成的影响及其机理的研究
RNA合成 RNA聚合酶 粘膜上皮细胞 电离辐
2007/12/19
摘要 本文观察了15戈瑞γ-射线全身照射后,大鼠小肠粘膜上皮细胞核体外转录活性,从染色质结合的RNA聚合酶和可溶性RNA聚合酶活性变化探讨辐射对核转录活性的抑制机理。实验结果表明:(1)照后2小时、8小时和24小时,核转录活性分别下降22.7％、20.8％和28.2％;(2)染色质结合的RNA聚合酶活性变化与细胞核转录活性变化基本平行,提示核转录活性降低与核内染色质损伤有关;(3)照后24小时,核...
MDR1反义RNA降低细胞KB_(v200)的耐药性
ＭＤＲ１基因 反义ＲＮＡ 多药耐药性
2007/12/18
摘要 由ＭＤＲ１基因过度表达所引起的肿瘤细胞对化疗药物的耐药性，是导致化疗失败的主要原因之一．针对ＭＤＲ１中一段包含转录启始位点、翻译启始位点和转录正调控区的序列，设计了反义ＲＮＡ并将其克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ上．用脂质体包裹载体导入ＭＤＲ１高表达的耐药细胞ＫＢｖ２００中，在反义ＲＮＡ转染的细胞中，ＭＤＲ１在ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达都有下降，细胞内药物的浓度有所提高，对长春新碱、阿霉素的耐药...
反义RNA抑制人黑色素瘤细胞表面粘附分子CD44的表达及抑瘤效应
ＣＤ４４ 反义ＲＮＡ 黑色素瘤 致瘤性
2007/12/17
摘要 将细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｓ的ｃＤＮＡ反向插入到真核细胞表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ－ＣＡＴ和ＭＭＴＶ－ＬＴＲ启动子下游，构成ＣＤ４４Ｓ的反义ＲＮＡ载体．将其用电击法导入ＣＤ４４＋的人黑色素瘤细胞系ＨＭＭ２３９，转录出的反义ＲＮＡ能不同程度地抑制ＨＭＭ２３９表面ＣＤ４４的表达．ＣＤ４４的表达被抑制后，瘤细胞与透明质酸的结合力下降，细胞的体外生长速率不受影响．将其接种裸鼠皮下，发现其致瘤性明显降低
...
摘要 ｒａｓ原癌基因的点突变是人胃癌发生发展的重要机理之一。利用能表达ｃ－Ｈ－ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ的质粒，导入人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３，研究了ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ对人胃癌细胞生长及恶性表型的作用，结果表明，ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ可引起ＢＧＣ－８２３生长速率及形态的变化，在半固体培养基中细胞集落形成能力减弱，部分地抑制了ＢＧＣ－８２３在裸鼠体内的致瘤性。ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ对其ＲＮＡ的过...
kitl非编码区突变导致RNA剪切异常的小鼠
乙烷基亚硝基脲 kitl基因 白斑 小鼠
2007/12/11
本文主要采用RT-RCR技术从kitl1-bao纯合子和正常C57BL/6（B6）小鼠总RNA中扩增出kitl基因片段，测序后与GenBank (登录号：NM_013598)序列比对，找到mRNA上突变部位。PCR扩增kitl基因组DNA上对应部位进一步测序验证。结果发现kitl1-bao 突变纯合子kitl基因 mRNA缺少第8号外显子。在基因组DNA上kitl基因第8号内含子第2个碱基由T转换...
大型纤毛虫总RNA的提取方法
大型纤毛虫 冠突伪尾柱虫 RNA提取
2007/12/11
以冠突伪尾柱虫为材料,建立了一种适合于富含Rnase和多糖的大型纤毛虫总RNA的提取方法.该方法采用异硫氰酸胍和β-巯基乙醇联合快速变性,酚、氯仿和异戊醇抽提,同时在变性剂存在的条件下两次选择性地沉淀RNA,从而有效地去除了DNA、蛋白质和多糖.所得RNA样品经电泳、紫外分光光度法检测和RT-PCR分析,证实为完整、均一且无基因组污染的总RNA.这为构建冠突伪尾柱虫有小核系与无小核系之间的削减文库...
COS-7细胞中小发卡RNA介导的RNA干涉
小发卡RNA RNA干涉 COS-7 绿色荧光蛋白
2007/12/7
摘要利用U6启动子转录小发卡RNA介导的RNA干涉是最近发展起来的在哺乳动物细胞中特异性抑制指定基因表达的新技术，已有实验证明它在小鼠畸胎瘤P19等细胞系中具有强烈的抑制基因表达的作用。 本文对COS-7细胞系中U6启动子转录GFP基因的小发卡RNA介导的RNA干涉现象进行了研究，结果表明：U6启动子转录的小发卡RNA具有RNA干涉作用，即可以在COS-7细胞中特异性地抑制含有对应序列的基因GFP...
蓖麻蚕核糖体RNA基因外转录间隙区(ETS)部分顺序
RNA基因 蓖麻蚕核糖体
2007/12/7
摘要根据rRNA杂交定位的结果，分离了带有外转录间隙区(ETS)的蓖麻蚕RRNA基因次级克隆pARII的BamHI-PstI片段。利用部分酶解法作了较精细的内切酶谱，测定了各片段的大小。由BamHI5′端，对该片段进行了顺序分析，在已测定的BamHI-AluI片段的219个核苷酸顺序中，酶切位点的识别顺序的定位与部分酶切法的定位结果一致，片段中可能存在4个反向重复顺序
摘要RNAi是多种生物体内由dsRNA介导的同源mRNA降解现象。这是一个高度特异化的过程，涉及多种蛋白质的共同参与。在这一过程中，siRNA的结构影响其两条链装配到RISC中去的能力。除了与RISC结合外，siRNA还引导了RITS复合物结合到同源染色质，介导异染色质化过程。干扰效应的扩散，即系统性沉默可能依赖于跨膜蛋白的转运，并且很可能是在多因素调控下完成的。Abstract: RNA int...
RNA干涉在纤毛虫中的研究进展
纤毛虫 双链RNA(dsRNA) RNA干涉(RNAi)
2007/8/5
摘要：RNA干涉是dsRNA介导的基因沉默现象,本文简要介绍了其作用的机制和生物学意义,重点阐述了RNA干涉在原生动物纤毛虫中的发现与应用, 比较了 RNA干涉与纤毛虫大核基因组重排机理的异同, 并对RNA干涉在纤毛虫中传输的技术途径-RNAi 喂饲法的原理也做了详细的介绍.