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人组织激肽释放酶成熟蛋白在大肠杆菌中的高效表达
人组织激肽释放酶 大肠杆菌 高效表达
2007/12/24
摘要 将编码人组织激肽释放酶成熟蛋白的基因片段扩增并分别克隆到原核表达载体pET2 8(b)及分泌型表达载体pET2 0 (b)中 ,使其C端融合 6×HisTag序列 .转化不同受体菌 ,IPTG诱导表达后利用SDS PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析 .在 6株基因工程菌株中 ,均表达出分子量约30kD的激肽释放酶融合蛋白 ,其中激肽释放酶在pET2 8载体中的表达水平高于pET2 0...
摘要 基于真菌羊毛甾醇14α-去甲基化酶(CYP51)活性位点的三维结构设计并合成了新型四氢异喹啉类抗真菌先导化合物. 体外抗真菌活性研究显示: 设计的先导化合物具有较好的抗真菌活性. 其中化合物5f和5g对于5种测试菌的抗真菌活性强于或相当于对照药物氟康唑. 先导分子通过与靶酶活性腔氨基酸残基的非共价键结合产生抗真菌作用, 避免与血红素辅基Fe原子发生配位结合, 为一类具有新作用机理的非氮唑类抗...
摘要 从链霉菌 C- 3662发酵上清液中 ,通过硫酸铵沉淀 ,CM- Sepharose Fast Flow和 Phenyl-Sepharose Fast Flow等层析色谱 ,分离纯化得到了具有纤溶活性的蛋白酶 CGW- 3,反向 HPLC鉴定纯度为 90 % ;每立升发酵上清液可得到 8mg纯品 ,活性回收率 46% ,CGW- 3为一单肽链蛋白 ,分子量 2 2 72 1 ,对丝氨酸蛋白酶...
利用真菌纤维素结合域(CBD)保守性序列进行草菇木聚糖酶cDNA的克隆
Volvariella volvacea cellulose-binding domain(CBD) xylanase cDNA
2007/12/21
Cellulose binding domains (CBDs) are present in the majority of fungal cellulases and hemicellulases. Based on the conserved region of CBDs, degenerate primers were designed and used to amplify the 5′...
摘要9)下该酶保持稳定 .Zn2 + 、Cu2 + 、Fe2 + 、Cd2 + 、Pb2 + 可使酶完全失活 ,螯合剂、盐酸羟胺、溴替丁二酰亚胺及离子型去垢剂SDS抑制R2酶的溶菌作用 ,而非离子型去垢剂TritonX 1 0 0等则能促进溶菌 .R2酶溶菌谱广泛 ,能够溶解多种鸡卵清溶菌酶不能作用的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 .从对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)的高...
假单胞菌海因酶基因在大肠杆菌中的高效表达(英文)
D-对羟基苯甘氨酸 海因酶 恶臭假单胞菌 基因表达
2007/12/21
摘要 为实现利用生物酶转化法进行D 对羟基苯甘氨酸的工业化生产 ,构建了 3株海因酶基因工程菌 .利用PCR技术从恶臭假单胞菌 (Pseudomonasputida)CPU 980 1染色体DNA中扩增得到长约1.8kb的含编码区和自身启动子的海因酶全基因 .通过将海因酶全基因插入pMD18 T质粒、海因酶基因的编码区与pET 17 b质粒重组、海因酶基因编码区和T7强启动子一起插入pMD18 T...
摘要 对海洋细菌QD80所产低温碱性蛋白酶进行了基因克隆和序列分析,对此酶的性质进行了初步研究.此酶基因开放阅读框架为1377bp,分子量为49.9kD.此序列上游-8bp处为该基因的SD序列,-10区和-35区分别有5′TAGAAT3′和5′TTGACC3′的保守序列.该酶最适pH为9.5,最适反应温度为30℃,在10℃酶活力仍能保持30%以上.该酶对氧化剂H2O2的抗氧化作用明显,浓度达到4g...
摘要 光合细菌 Chromatium vinosum可溶性氢酶经 4次柱层析 (Whatman DE- 52 ,TSK- DEAE,Ultragel Ac A- 44 ,Mono Q)分离提纯后被纯化 630倍 ,得率为 33.5% .可溶性氢酶催化放氢比活性为 7.5μmol· min-1· mg-1.SDS- PAGE结果显示 ,可溶性氢酶由 52 k D和 2 1 .5k D两个亚基组成 ....
高比活力大肠杆菌磷酸转乙酰酶的纯化
大肠杆菌 磷酸转乙酰酶 辅酶A
2007/12/21
摘要 从国内大肠杆菌菌株1.505提取磷酸转乙酰酶(PTA),经数步纯化荻得了高比活力酶制品。该酶制品比粗酶纯化了61倍,比活力达1040单位/mg,经聚丙烯酰胺凝胶电泳检查,仅有两条蛋白质区带。用经过纯化的酶测定辅酶A,其结果6.75单位/10微升酶液在光径1cm时,233nm的吸收值△E_(PTA)<0.009。
摘要 通过三步亚克隆 ,将单点突变葡萄糖异构酶 ( GIG1 38P)基因及其调控序列插入链霉菌质粒p IJ40 83,构建重组表达质粒 p IJ40 83- GI1 .用重组质粒转化变铅青链霉菌 TK54原生质体 ,经硫链丝菌素抗性 ( Th R)筛选 ,获得重组菌株 TK54/p IJ40 83- GI1 .酶活力测定和 SDS- PAGE分析表明 ,GIG1 38P基因在变铅青链霉菌中得到高...
大肠杆菌AE109青霉素G酰化酶的分离纯化及性质研究
青霉素G酰化酶 疏水层析 酶的性质
2007/12/20
摘要 由发酵培养液所得大肠杆菌AE109菌体,先经高渗休克处理,继经D-苯甘氨酸-Sepharose 4B和DEAE-纤维素柱层析分离纯化得到青霉素G酰化酶,酶制品在非变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈一条区带,而且可以结晶。在SDS变性条件下解离为α和β两个亚基。 酶性质的研究结果表明,由大肠杆菌工程菌AE109菌株所得青霉素G酰化酶与其亲本大肠杆菌AS1.76菌株所得青霉素G酰化酶性质相同。
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摘要 Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)逆转录酶(RT)在抗病毒感染及AIDS治疗药物的设计中是一个重要的靶分子,并且可作为工具酶应用于逆转录PCR等分子生物学研究中。本研究将HIV-1RT基因经PCR扩增并修饰后克隆入大肠杆菌表达载体pBV220,所获重组子所表达的HIV-1RT蛋白占菌体总蛋白的8％左右,且经[~3H]dTTP掺入法证实该重组HIV-1RT具有RT聚合酶活性。用Q-Sepharo...
大肠杆菌莽草酸途径限速酶多基因盒的构建及基因替换
多基因盒子 Red重组系统 基因破坏和基因替换
2007/12/19
摘要 优化大肠杆菌芳香族氨基酸生物合成代谢途径 ,构建莽草酸代谢途径限速酶的多基因盒PtacaroAaroCaroBkan .利用Red重组系统 ,在破坏整体调控基因csrA时 ,替换多基因盒 .Southern印迹证实 ,基因破坏和基因替换是成功的 .摇瓶发酵表明 ,构建的基因工程菌株比原始菌株基础产酸率提高了 4 5 3倍
摘要 将编码光合细菌Rhodobactersphaeroides 5- 氨基乙酰丙酸合酶 (ALAS)的同工酶基因hemA、hemT转入E .coli中进行高表达 ,并将高表达的同工酶进行分离、纯化 .纯化的hemA是可溶的 ,并具有催化活性 ,而hemT大部分是不溶的 ,且在体外条件下无活性 .与其它重组ALAS相比 ,R .sphaeroides的hemA活性表达需PLP作为催化因子 ,除去...