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应用RT - PCR 方法对海南坡鹿细胞分裂周期蛋白42 (Cell division cycle 42,CDC42)编码区进行扩增,将扩增产物与PET - 42a 载体连接,重组质粒鉴定正确后,进行生物信息学分析;构建pET42a - hdCDC42 表达载体,经IPTG 诱导表达,将表达产物进行SDS - PAGE、可溶性分析、纯化及Western blot 分析。结果表明,海南坡鹿CDC42...
北极狐GHR基因cDNA的克隆及序列分析
北极狐 GHR 基因 克隆 序列分析
2016/7/20
本文根据狗(AF133835)的GHR 基因cDNA 编码全序列设计了三对引物,利用RT - PCR 方法克隆出北极狐GHR 基因编码区全长cDNA 序列(GenBank accession No. EU304325)。结果表明,北极狐GHR 的ORF 为1 917 bp,编码638 个氨基酸的前体蛋白,由18 个氨基酸的信号肽和620 个氨基酸的成熟肽组成。通过同源性比较发现北极狐与狗的同源性最...
两个蛇毒基因克隆及cDNA序列多态性再分析
α-银环蛇毒素 多态性 RNA编辑 突变
2009/6/23
α-银环蛇毒素（α-bungarotoxin）是一种突触后神经毒素，广泛存在于眼镜蛇科蛇类的毒腺中，对于该基因cDNA多态性是否真实一直存有争议。本研究从银环蛇基因组DNA中克隆到α-银环蛇毒素基因序列，并对其中5个克隆进行测序和序列比对分析。作为参照，从同一次反转录得到的cDNA混合物中，克隆了蛇毒神经生长因子cDNA，并对其进行测序、比对和突变情况分析。综合各研究组报道的α-银环蛇毒素cDNA...
用SMART技术构建了绒山羊(Capra hircus)毛囊兴盛期皮肤组织的cDNA质粒文库。Trizol Reagent(GIBCO/BRL)分离RNA后，用Oligotex(QIAGEN)提取mRNA；以锚定引物反转录合成cDNA第一链作为模板，以2个锚定引物，用长链PCR扩增全长cDNA双链。CHROMA SPIN-400去除小片段后用SfiⅠ酶切，连接到SfiⅠ消化的pBluescript...
史氏鲟Sox9基因cDNA的克隆及在早期发育过程不同组织中的表达
史氏鲟 Sox9基因 基因表达
2009/6/22
利用RT-PCR和RACE的方法从史氏鲟(Acipenser schrenckii)中克隆了Sox9基因cDNA的部分序列(1 140 bp)。组织特异性表达分析表明Sox9基因在1[+]-3[+]年龄史氏鲟的大脑、心脏、肝脏、眼睛、胰脏、肾脏、精巢和卵巢等8种组织中均有表达，只是表达量随发育阶段和组织的不同而稍有差异。刚孵出1日龄的史氏鲟鱼苗中Sox9微量表达，而孵出15日龄的鱼苗中表达量上升。...
按照Promega公司的mRNA提取试剂盒操作手册，从圆斑蝰蛇(Daboia russellii siamensis)的毒腺中提取mRNA；利用RT-PCR的方法进行体外扩增，获得C-型凝集素蛋白的基因，克隆到pMD18-T载体中。随机挑选14个阳性克隆进行核酸测序，获得7个编码不同蛇毒C-型凝集素样蛋白亚基的cDNA，分别命名为DRS-L1、DRS-L2、DRS-L3、DRS-L4、DRS-L5...
蒙古红鮊肥胖基因cDNA的克隆与组织表达特异性研究
蒙古红鲔 ob基因 leptin 组织
2009/6/3
本文根据已知的人和鼠o6基因序列设计引物，采用RT-PCR(reverse transcriptase—polymerase chain reaction)技
术，从蒙古红鲔脂肪组织RNA中扩增到o6基因片段，获得o6基因编码区438bp的序列。与人和其他动物比较，蒙
古红鲐与人、猪和鼠o6基因核苷酸编码序列的同源性分别为82．9％、84．0％和99．1％，蒙古红鲐o6基因编码的蛋
白lep...
cDNA Microarray Analysis of Differential Gene Expression in Boar Testes during the Prepubertal Period
Boar Testis DNA Chip Analysis Gene Expression DNA Sequence
2016/4/29
In an attempt to understand the biochemical mechanism for the synthesis of the anabolic steroid, 19-nortestosterone, produced by prepubertal boar testes and its physiological role, normalized compleme...
摘要 金属硫蛋白是一类小分子量的金属结合蛋白 ,有 β,α两个结构域 .用另一个 α结构域取代金属硫蛋白的 β结构域 ,得到突变体 αα.通过 PCR法在 αα- c DNA翻译起始密码子 ATG前加入植物偏爱的碱基组合 AACA,构建 Ca MV双 35S启动子驱动的 αα- c DNA植物表达载体 p GPTVd35S-αα,此载体以抗除草剂基因 ( bar)作为选择标记物 .用根癌农杆菌介导...
摘要 为研究蛇毒C型凝集素类蛋白的快速进化机制和结构功能关系 ,使用PCR技术扩增了若干编码C型凝集素类蛋白 β链的cDNA分子以及agkisasinβ的基因组DNA ,并将这些扩增产物进行克隆和测序 .对测序结果与试验过程中的具体条件进行了因果关系分析 ,并且进行点阵图比较和多序列比对 .结果表明 ,可能存在“转录后同源重组”等转录后的事件 ,在蛇毒C型凝集素类蛋白的多样性上起着重要的作用 .对...
核糖体蛋白RPL15 cDNA序列在真骨鱼类系统进化研究中的价值
核糖体蛋白L15（RPL15） 分子系统学 真骨鱼类
2007/12/21
摘要应用RT-PCR, 从真骨总目（Teleostei）5目15种鱼类中首次克隆了核糖体大亚基蛋白L15 (RPL15, ribosomal protein L15) 的完整cDNA序列。以海鲢形亚组（Elopomorpha）的鳗鲡作为外类群, 对这些真骨鱼类的核糖体蛋白L15 cDNA序列进行了系统发育分析, 结果表明: (1)RPL15基因在真骨鱼类等许多真核生物进化中高度保守; (2)系统树...
大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因的cDNA克隆及序列分析
神经元特异性烯醇化酶 ｃＤＮＡ克隆 逆转录－聚合酶链式反应
2007/12/20
摘要 用ＲＴ－ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）的ｃＤＮＡ，将此包括编码全长ＮＳＥ４３３个氨基醚的ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒，并用ＰＣＲ方法测定了全部顺序，经重复实验，发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠与Ｆｏｒｓｓ－Ｐｅｔｔｅｒ报导的ＳＤ大鼠ＮＳＥ基因顺序，有两外单碱基的差别，其中一个涉及氨基酸的改变。同时还对ＲＮＡ的提取及长片段ＤＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ扩增进行了方法学的探讨。
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pemt2-cDNA的转染抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞c-Met及Bcl-2的表达并诱发凋亡
磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶-2(PEMT2) 磷脂酰胆碱 肝癌 凋亡 c-Met Bcl-2
2007/12/20
摘要 为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (phosphatidylethanolamine N methyltransferase 2 ,PEMT2 )的转染抑制大鼠肝癌CBRH 7919细胞增殖的分子机理 ,构建了带有完整的pemt2 cDNA基因质粒载体 ,经转染和鉴定 ,确知其在大鼠肝癌细胞系CBRH 7919细胞中稳定高表达 .用细胞培养、免疫细胞化学、Western印迹、流式细...
人牛精浆蛋白相关新基因的cDNA克隆、定位和表达
牛精浆 人牛精浆相关蛋白 cDNA末端快速扩增 基因克隆与定位 GST融合表达
2007/12/18
摘要 为了研究牛精浆 (bovineseminalplasma ,BSP)蛋白及其相关蛋白在受精及受精卵发育中的重要作用 ,寻找BSP蛋白相关新基因 .采用cDNA末端快速扩增 (RACE)技术 ,克隆了一个BSP蛋白相关基因的cDNA序列 .应用辐射杂种细胞系 (RH)技术进行了基因染色体定位 .通过RT PCR检测了该基因在人体各组织中的表达情况 .并将该基因编码的蛋白进行了原核表达 .新基因...