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T-DNA突变体是研究基因功能的重要资源。高效热不对称交错PCR (hiTAIL-PCR)是克隆突变体中T-DNA插入位点侧翼序列的常用方法。然而我们发现, 利用hiTAIL-PCR克隆到的一些侧翼序列并不对应于宿主的染色体DNA序列, 而是质粒的骨架DNA片段。通过设置1组RB-S4/AC1或者LB-A4/AC1对照反应, 用PCR方法鉴定了hiTAIL-PCR扩增产物中位于T-DNA侧翼的质粒...
核桃内参基因实时荧光定量PCR表达稳定性评价
核桃 实时荧光定量PCR 内参基因
2018/12/11
利用实时荧光定量PCR技术, 结合geNorm、NormFinder和BestKeeper软件研究了5个常用的植物内参基因GAPDH、β-Actin、18S rRNA、UBQ和EF-1在不同基因型、不同组织、不同发育时期核桃(Juglans spp.)中的表达情况, 以期筛选出在核桃中稳定表达的内参基因。结果显示: GAPDH和EF-1在核桃所有样品中均表达稳定, 由于表达丰度偏低, 所以适合作为...
中国两种钩虫成虫的PCR虫种鉴定研究
钩虫 分子标记物 鉴别
2013/11/25
目的对中国流行的美洲钩虫和十二指肠钩虫进行PCR鉴别。方法通过对中国五省钩虫患者使用双羟萘酸噻嘧啶驱虫获得钩虫成虫，抽提单条美洲钩虫和十二指肠钩虫总DNA（各25条），用美洲钩虫和十二指肠钩虫线粒体DNA细胞色素氧化酶亚基1（mitochondrial cytochrome oxidase 1, CO1）基因特异性引物（NaFNaR，AdFAdR）进行PCR扩增。对PCR产物进行电泳、测序。使...
叶绿体PCR-SSCP标记发现华木莲两个截然不同的遗传类型
叶绿体基因组 遗传结构 PCR-SSCP 华木莲
2009/8/4
华木莲Sinomanglietia glauca是一种珍贵稀有的保护树种。该树种于上个世纪90年代在江西宜春发现, 近年来在湖南永顺发现两个群体。因为新居群的发现和前人研究所采用的分子标记不稳定, 本文用叶绿体PCR-SSCP标记对华木莲遗传结构进行了重新分析。结果表明, 江西群体和湖南群体表现为两种截然不同的叶绿体遗传类型, 地区内没有遗传变异。我们推测这种遗传结构可能是华木莲在第四纪冰期遭受强...
作者进行了较广泛的样品采集，通过实验分离纯化培养得到多个鞘藻目种类的株系，并采用PCR技术新获得
鞘藻目2属8个种类的部分28S rDNA序列，连同GenBank中的另两条序列，分析的物种涵盖了鞘藻目中的每个属。
通过比较分析绿藻纲中包括此1O条序列的共36个种类的同一基因序列，并选取Trebouxiophyeeae中的椭圆小球藻
(Chlorella ellipsoiden)和 0c pe...
构建包含RAc1 基因cDNA 片段的质粒, 作为水稻肌动蛋白基因RAc1 之mRNA 定量检测的标准品,建立检测方法, 为水稻其他基因的定量建立内参。从水稻叶总RNA 中逆转录扩增总cDNA, PCR 扩增RAc1基因中设计的目的片段, 将纯化的目的片段与pMD19-T Simple 载体进行连接, 转化宿主菌JM-109 , 提取重组质粒DNA, PCR 鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260...
南瓜属植物RAPD-PCR反应体系的建立与应用
南瓜属 RAPD-PCR 混合DNA样品池 聚类分析
2009/3/17
采用混合DNA样品池,利用正交法对南瓜属植物RAPD反应条件进行了探讨,并利用建立起来的优化体系,从35条引物中筛选出7条引物,对供试中国南瓜、印度南瓜和黑籽南瓜3个栽培种的7个品种进行了RAPD分析,结果均获得了较多的多态性位点.RAPD-PCR反应扩增结果还显示,日本南瓜兼有中国南瓜和印度南瓜的特征带,聚类分析的结果则表明,它与中国南瓜的亲缘关系更近.
利用SDS-PAGE 分析、PCR 扩增和序列测定与分析研究了长发带芒草(Taeniatherumcrinitum) 的高分子量谷蛋白亚基及其基因。结果显示, 长发带芒草中发现的高分子量谷蛋白亚基与普通小麦中的类似, 但迁移率存在较大差异。其中, x 型亚基均比Dx2 亚基迁移率小或接近, y 型亚基均比Dx12 亚基迁移率更快。本研究结果揭示了带芒草属具有与普通小麦类似的高分子量谷蛋白亚基, 这...
植物转基因成分PCR检测内对照系统的建立
rbcL基因 内对照 PCR检测 转基因成分
2009/1/12
为了建立适用于多种植物的转基因成分PCR检测的内对照系统，本文针对植物叶绿体DNA rbcL基因的保守区域，设计了一对扩增片段为433bp的PCR引物，通过对23种植物的PCR扩增表明，该引物不但在4种单子叶植物(大米、玉米、小麦、洋葱)、10种原始花被亚纲的双子叶植物(甘蓝、白菜、大豆、豇豆、花生、胡萝卜、芹菜、菠菜、大麻、棉花)及7种合瓣花亚纲的双子叶植物(圣女果、番茄、辣椒、马铃薯、南瓜、黄...
金银花ISSR-PCR反应体系的建立与优化
金银花 ISSR 反应体系 优化
2009/1/6
以金银花叶片基因组DNA为模板，通过单因素试验，研究了退火温度、Taq DNA 聚合酶的用量及模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+浓度等6种因素对ISSR－PCR扩增的影响，建立了适合于金银花ISSR-PCR反应体系和扩增程序，即在20 μL反应体系中，内含1×PCR反应缓冲液（Mg2＋free）、1.5 U Taq DNA 聚合酶、0.15 mmol·L-1 dNTPs、0.4 μmol·L-...
采用PCR检测方法从饲料的主要原料豆粕、玉米蛋白粉中成功地检出启动子35S (35S-promoter,originated from cauliflower mosaic virus)、终止子NOS (nopaline synthase-terminator,derived from Agrobacterium tumefaciens)、耐除草剂基因EPSPS(5-enolpyruvylshik...
生物素掺入PCR产物的反向杂交技术分析HLA基因型
生物素掺入ＰＣＲ产物 反向杂交 ＨＬＡ－ＤＰＢ_１基因分型
2007/12/24
摘要 本文介绍了与常规生物素或荧光标记引物不同，以及与同位素掺入ＰＣＲ产物不同的反向杂交技术，研究了生物素最佳掺入条件，测出加尾探针联结到尼龙膜上所需紫外光的强度，比较了生物素５＇端标记引物与生物素掺入ＰＣＲ产物的显色灵敏度，并根据实验测得的最佳条件分析了３个标准细胞株ＨＬＡ－ＤＰＢ_１基因型。
棉花纤维发育和体细胞胚发生过程中实时定量PCR内对照基因的筛选
棉花 纤维发育 持家基因 内对照 实时定量PCR(qRT-RCR) 体细胞胚胎发生
2013/10/14
实时定量PCR技术(qRT-PCR)能够快速地对多个样品进行基因表达分析, 因此已成为芯片和微点阵数据验证的常用手段. 为了得到更精确的数据, 通常需要一个和多个内对照基因来平衡化qRT- PCR数据. 目前一般选择持家基因(housekeeping gene)作为内对照, 但很多持家基因的表达水平随着环境的改变而改变. 在棉花纤维发育和体细胞胚发生机制研究过程中已经产生大量芯片和微点阵数据, 但...