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非同位素PCR-SSCP方法的初步临床应用
非同位素 PCR-SSCP 平滑肌肉瘤 Alzheimer病
2008/1/10
单链构象多态性检测法 (PCR-SSCP)是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而,在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物,从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的PCR-SSCP方法, 该方法不用同位素标记引物,而直接在溴乙啶染色的聚丙烯酰胺凝胶上显示SSCP。用该方法对55例平滑肌肉瘤p53基因第7外显子突变的检测表明,38%的瘤组织DNA存在异常的S...
用长PCR方法检测含有较大缺失或插入的DNA大片段
长PCR 等位基因共扩增 缺失和插入
2008/1/9
选择位于19q13.3上的人类肌张力蛋白激酶基因(myotonin protein kina se gene,MT-PK)为靶基因(基因全长为14kb),以G+C含量较高且含有1kb缺失或插入,由基因第8内含子中的Alu±1kb的5'端至第15外显子3'非编码区中的CTG重复序列3'端,即两者间的距离为5.3kb的DNA片段为待扩增靶序列,通过优化DNA聚合酶的组合和反应缓冲体系,点考查了含有Al...
摘要
利用PCR合成DNA长片段（Synthesis Large Frament DNA using PCR ，SLFD PCR）是一种有效的合成长片段DNA的方法。采用一段已知的500~600碱基的DNA片段为PCR模板，根据所要合成的DNA序列可以设计一系列的PCR引物，这些引物都位于模板DNA的5′端，长度为50~60 bp, 且从５′到３′方向顺序重叠 ,重叠碱基数目为12~15，全部引...
微卫星PCR产物变性与非变性PAGE-银染检测方法的比较The Comparision of Denatured and non-denatured PAGE–Silver- Staining Detection of PCR Product of Microsatellites
微卫星 PAGE PCR 银染
2008/1/8
摘要
用鸡的微卫星引物对6个中国地方鸡种的两个微卫星位点进行PCR扩增。将扩增产物在变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）上进行电泳，经银染，表明微卫星产物在二者上的电泳结果有明显的差异。在非变性聚丙烯酰胺凝胶中，表现为有较多的非特异带，而在变性胶中微卫星扩增产物条带清晰，易于鉴定。Abstract：The genomic DNAs from six chicken breeds in Chin...
苦瓜MAP30基因原核表达载体的构建和PCR快速检测重组子的研究 Construction of Prokaryotic Expression Vector for MAP30 Gene and Study of PCR Methods for Rapid Identification of Recombinant
MAP30 PCR 克隆子筛选 苦瓜
2008/1/8
摘要
根据已报道的序列，把苦瓜(Momordica charantia) MAP30基因成功克隆到原核表达载体pET28a（+）中，并对PCR快速检测阳性克隆进行了研究。结果表明，直接用菌落、菌液、酚氯仿处理过的菌液,以及提取的质粒进行PCR都可以成功地筛选阳性菌落。其中，酚氯仿处理过的菌液PCR与质粒PCR的结果最接近，而且比质粒PCR简单，因此可作为方便可靠的阳性克隆筛选的新方法。Abstr...
人类血小板抗原1～6系统同步基因分型的研究Study on the Simultaneous Genotyping of Human Platelet Antigens of 1, 2, 3, 4, 5, 6 System by PCR-SSP and Its Applications
序列特异性引物—PCR 人类血小板抗原 基因分型
2008/1/8
摘要
为研究采用PCR—SSP技术，建立可靠的人类血小板抗原HPA-1,2,3,4,5,6系统的同步基因分型方法，并以所建立的方法研究血小板抗原。设计合成18条序列特异性引物，探索最佳退火温度，通过调整引物浓度、Mg2＋离子浓度，使HPA-1~6系统等位基因在同一条件下进行同步扩增和扩增产物在同一凝胶中进行同步电泳。引物的特异性和灵敏度采用基因型已知的质控DNA进行验证。应用此方法，对2000年...
对159名中国辽宁汉族个体的基因组DNA进行分析，共检出42种等位基因，其中以DRB1*09012(12.8%)、*0701(10.7%)、*1501(10.4%) 最为常见，其次为DRB1*1201(7.9%)、*1202(7.5%)、*1101(6.6%)、*0301(5.0%)。并发现辽宁汉族人DRB1等位基因频率与白种人间存在明显差异，揭示不同人种有其自己的主要等位基因。同时对本技术在HL...
人类MINK基因的两种突变导致长QT综合征（LQTS）。我们设计了两对引物利用PCR-SSCP结合直接测序法在病人及健康者中对MINK基因进行分析，结果发现第149位密码子产生A→G转换。在所研究的对象中，此变化在病人及正常对照者中均有存在。提示MINK基因的此突变性质为非病理性的多态突变。
应用实时定量RT-PCR技术检测b地中海贫血珠蛋白基因的表达Quantitative Analysis of Human Globin Gene Expression in b-thalassemia Using Real-Time RT-PCR
地中海贫血/遗传学 珠蛋白基因 基因表达 实时定量RT-PCR
2008/1/6
摘要
为了定量检测 b 地中海贫血(b 地贫)的 a、b 和γ珠蛋白基因表达水平， 提取正常成人对照组、正常胎儿对照组和b 地贫患者组组成的样本 DNA，采用反向点杂交法（RDB）分析b 地贫各种突变类型；提取样本RNA用于进行针对a、b 和γ珠蛋白基因的荧光实时定量RT-PCR（FQ RT-PCR）。根据FQ RT-PCR原理，设计合成分别对应于a、b 和γ珠蛋白基因的3对引物和3条荧光探针，...