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应用于染色体步移的PCR扩增技术的研究进展
染色体步移 反向PCR 连接法PCR 特异引物PCR
2007/12/26
摘要各种建立在PCR基础上染色体步移的方法能够根据已知的基因序列得到侧翼的基因序列。染色体步移技术主要应用于克隆启动子、步查获得新物种中基因的非保守区域、鉴定T-DNA或转座子的插入位点、染色体测序工作中的空隙填补，从而获得完整的基因组序列等方面。其方法主要有3种：反向PCR的方法，连接法介导的PCR的方法以及特异引物PCR的方法。文章就各种方法进行举例说明并加以分析比较。
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四引物PCR扩增反应的单管SNP快速测定法
单核苷酸多型性 聚合酶链反应 等位基因特异性延伸反应 人为错配碱基
2007/12/24
摘要 建立一种在单管中进行单核苷酸多型性 (SNP)快速测定的高效廉价方法 .以人ABCA1基因中的I82 3M为研究对象 ,设计 4种引物进行PCR扩增 ,其中两种引物用于扩增一段含有SNP位点的DNA片段 ,另两种引物为SNP位点特异性引物 ,4种引物在单管中同时进行PCR扩增反应 ,根据延伸产物的长度确定SNP的类型 .为提高SNP测定的特异性 ,在特异性引物的 3′端倒数第 3个碱基引入了...
摘要 为建立一种新的SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR方法 ,使之能够有效消除引物二聚体 (PDs)对实时定量结果的影响 .对RT PCR特异性扩增产物和PDs分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析 .依据PDs和扩增产物的熔解温度 (Tm)特点 ,在通用的三步法的延伸步骤之后 ,增加一个短暂的 (5s)恒温和荧光检测步骤 ,使这个步骤的温度高于PDs的Tm,但低于扩增产物的Tm,简称该法为四...
生物素掺入PCR产物的反向杂交技术分析HLA基因型
生物素掺入ＰＣＲ产物 反向杂交 ＨＬＡ－ＤＰＢ_１基因分型
2007/12/24
摘要 本文介绍了与常规生物素或荧光标记引物不同，以及与同位素掺入ＰＣＲ产物不同的反向杂交技术，研究了生物素最佳掺入条件，测出加尾探针联结到尼龙膜上所需紫外光的强度，比较了生物素５＇端标记引物与生物素掺入ＰＣＲ产物的显色灵敏度，并根据实验测得的最佳条件分析了３个标准细胞株ＨＬＡ－ＤＰＢ_１基因型。
摘要 通过聚合酶链反应 ( PCR)自人脾 c DNA扩增 RO 蛋白 ( 60 k D)编码 DNA片段 .将该片段定向插入麦芽糖结合蛋白 ( MBP)融合系统的 p MALTM- c载体中并转化 E.coli ( DH5α) ,通过酶联免疫印迹 ( IBT)筛选出具有 RO 抗原性的阳性克隆 .绝大部分阳性克隆表达完整的 RO 融合蛋白 ( 1 0 0k D) .但在传代过程中表达水平很快降低...
鹅肠道微生物区系的PCR-SSCP体系构建
鹅 微生物 PCR-SSCP
2013/4/26
聚合酶链反应单链构象多态性分析（PCRSSCP）技术是利用DNA单链构象具有多态性进行基因检测的一种快速、简便、较灵敏的分析技术，但其影响因素很多。研究运用PCRSSCP技术分析鹅肠道微生物区系，探讨了凝胶浓度，胶联度，PCR产物的稀释倍数，电泳时间和温度，是否加甘油、尿素和λ核酸外切酶等因素对SSCP图谱的影响。结果表明，凝胶浓度为12％，胶联度为39∶1，凝胶中不加甘油，电泳电压为12...
利用Taq DNA聚合酶对PCR产物直接进行顺序分析
非对称性PCR扩增 Taq DNA聚合酶 直接顺序分析
2007/12/21
摘要 Taq DNA聚合酶具有反应速度快、温度作用范围广及良好的续进性等特点,可视为一种理想的DNA顺序分析酶。本文首先对非对称性PCR扩增过程中单、双链DNA产物的积累情况进行了分析,然后采用标记延伸二步法,对Taq DNA聚合酶的性质及影响因素进行分析。为进一步改进Taq DNA聚合酶测序的方法,本反应建立了“Klenow-型”的直接掺入标记同位素测序法,即在反应液中加入与标记核苷酸相应的一定...
基于荧光定量PCR扩增反应的SNP测定法
单核苷酸多态性 实时聚合酶链反应 等位基因特异性延伸反应 人为错配碱基
2007/12/21
摘要 建立一种利用荧光定量PCR扩增反应进行单核苷酸多态性(SNP)快速测定的方法.以人β肾上腺素受体2基因中的Arg16Gly为研究对象,利用荧光染料SYBRGreenⅠ标记定量PCR产物,通过PCR生长曲线和融解曲线分析结果进行SNP分型.为提高SNP测定的特异性,分别在野生型和突变型等位基因的特异性引物3′端倒数第3个碱基位置,引入了一个人为错配碱基,使引物的错误延伸率显著降低,大大提高了S...
摘要 用竞争性 Ｐ Ｃ Ｒ 方法定量检测了大鼠肌球蛋白轻链 ２ 启动子（ｍ ｙｏｓｉｎ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ２ ｐｒｏｍ ｏｔｅｒ， Ｍ Ｌ Ｃ２）糜酶（ｃｈｙｍ ａｓｅ）融合基因在转基因小鼠不同组织中的表达情况，发现 Ｍ Ｌ Ｃ２ｃｈｙｍ ａｓｅ融合基因在转基因小鼠的心脏中有较高水平的表达，在骨骼肌中表达水平较低，在肾脏中有微弱表达；而在肝脏和肺中未检测到．表明 Ｍ Ｌ Ｃ２...
摘要 建立竞争性 PCR方法 ,以期用于转录水平基因表达的定量研究 .以检测大鼠颅骨骨细胞总RNA中骨形态发生蛋白 - 2 ( BMP- 2 ,bone morphogenetic protein- 2 ) m RNA含量为例 ,构建大鼠BMP- 2基因的竞争模板 ,以之为内对照进行竞争性 PCR.PCR反应结束后 ,电泳、拍照 ,扫描所扩增条带密度 ,作回归方程 .根据回归方程 ,计算出正常 7...
摘要 采用激光微切割与定量PCR技术,分析使用不同提取方法从不同固定方法固定的病理切片中提取的RNA.用70%乙醇、丙酮、甲醇、4%多聚甲醛固定肾脏冰冻切片,使用激光微切割技术切取肾小球,用硫氰酸胍方法(guanidinethiocyanatemethods,GTC)和Trizol试剂方法提取RNA,使用Taqman定量PCR方法分析比较各组RNA的量;选取丙酮固定的石蜡切片,使用激光微切割技术切...
两温度梯度多重PCR鉴别牛早期胚胎性别的技术研究
性别鉴别 两温度梯度PCR 胚胎
2007/12/21
摘要稳定、可靠和快速的牛胚胎性别鉴定方法在生产应用中具有重要意义。通过两温度梯度PCR方法对牛基因组、克隆胚胎、胚胎样品进行性别鉴别实验研究，建立了稳定、简便、快速的牛早期胚胎性别鉴别两温度梯度PCR方法，鉴定时间仅为57分钟。采用两温度梯度PCR方法对30枚奶牛胚胎进行了早期性别鉴别，并将鉴别的15枚胚胎（11枚为雌性，4枚为雄性）移植到同期处理的15头受体母牛体内。60天后妊娠检查，有7个受体...
改良DDRT-PCR研究苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因
DDRT PCR cell differentiation matrine gene expression leukemia
2007/12/21
The differentiation of human leukemia K562 cells can be induced by matrine. To investigate the mechanism of the induced cell differentiation, an improved DDRT PCR technique was applied to screen the d...
改进竞争性RT-PCR法测定缺碘大鼠颅骨中BMP-2基因表达变化
碘缺乏 骨发育 RNA竞争模板 骨形态发生蛋白2
2007/12/21
摘要 为更加精确地测定碘缺乏状态下大鼠颅骨组织中骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )mRNA表达水平 ,改进竞争性RT PCR方法 ,探讨碘缺乏对骨骼发育影响的分子机制 .将构建的DNA竞争模板克隆入pSportⅠ质粒中 ,利用pSportⅠ质粒中所含有的SP6RNA聚合酶启动子序列 ,将DNA竞争模板在体外转录成为RNA .以此RNA作为竞争性RT PCR中的竞争模板 ,与所提取的总RNA一同...