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摘要 本文介绍一种适合于多等位基因定型和结构分析的反相顺序特异性寡核苷酸探针杂交方法。将化学合成的多种探针分别经脱氧核苷末端转移酶(TdT)催化,于3′端加上100个以上碱基的Poly(dT)尾,然后将各探针分别以斑点固定于同一张尼龙膜上。用PCR法对该基因位点进行扩增,扩增的同时加入α-~(32)P-dCTP以直接参入放射标记,然后将PCR产物与膜固定探针杂交,以四甲基氯化铵根据探针长度统一洗涤...
利用RAPD-PCR技术分析东北地区16种小卷蛾的亲缘关系
RAPD 小卷蛾 亲缘关系
2007/12/20
利用RAPD-PCR技术对东北地区黄卷蛾族的16种小卷蛾的基因组进行随机扩增，构建出系统发育树，对其亲缘关系进行分析.系统树显示褐卷蛾属的3个种、条卷蛾属的两个种和黄卷蛾属的4个种的聚类方式和传统形态分类法基本一致.也发现了一些与传统分类结论不完全一致的现象，如同属的忍冬双斜卷蛾和棉花双斜卷蛾在系统树上没有聚在一起，而和不同属的松褐卷蛾、樱桃铅卷蛾聚在一起等.分析同属和不同属种间的遗传距离，初步得...
采用一种不需要限制核酸酶和连接酶的新方法——“PCR一步法”将芳香烃化合物降解的关键基因pheB和绿色荧光蛋白编码基因gfp融合，构建得到融合蛋白基因fpg。该方法在一个PCR反应体系中通过三个引物、两个模板扩增得到一个含有中间柔性肽段-Gly4Ser-的融合基因fpg。本文研究结果表明，PCR一步法是一种快速方便的构建融合基因的方法。Abstract: TP-PCR，a method dev...
单纯疱疹病毒的PCR直接基因分型
聚合酶链反应 基因分型 单纯庖疹病毒
2007/12/20
摘要 本文利用ＰＣＲ技术建立一种对ＨＳＶ直接基因分型的方法。在ＨＳＶ－Ⅰ、Ⅱ两型的ＤＮＡ多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物（ＨＤＰ－Ｂ）和两条型特异的下游引物（ＨＤＰ－１、ＨＤＰ－２）。三条引物共同组成一个扩增反应体系，在ＨＳＶ－Ⅰ产生５４３ｂｐ条带，ＨＳＶ－Ⅱ产生３７２ｂｐ条带，据此在基因水平上对ＨＳＶ进行分型。５株不同来源的ＨＳＶ（２株Ⅰ型，３株Ⅱ型）分型结果与病毒分离及血清学方法完全一...
大鼠肝脏脂酶基因的PCR扩增、序列分析和克隆
大鼠肝脏脂酶基因 序列分析 聚合酶链式反应 表达载体pGT－d
2007/12/20
摘要 报导了应用聚合酶链式反应（PCR）技术，扩增大鼠肝脏脂酶基因及其克隆和序列分析的结果．经31个循环的扩增，得到大鼠肝脏脂酶及其N端结构域的cDNA，前者为1508bp的片段，后者为1076bp的片段．克隆后，对此二片段进行了限制性内切酶物理图谱分析，测定了DNA序列，并已将它们克隆到表达载体pGT－d中．
Three mutative types of β-globin gene in 10 patients with β-thalassemia were detectedby PCR-SSCP analysis and direct sequencing. Among them, allo-double heterozygote mutation appeared in two patients....
RT-PCR法扩增的人溶菌酶cDNA的克隆及其核苷酸顺序分析
胎盘 溶菌酶 逆转录-聚合酶链反应 分子克隆 核苷酸顺序
2007/12/19
摘要 本文以人胎盘全RNA为底物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),制备出了人溶菌酶的cDNA片段。在限制性内切酶Sma Ⅰ存在的连接体系内,将此cDNA克隆入载体pUC12的Sma Ⅰ位点。用重组质粒双链DNA的末端终止法测定了其全部的核苷酸顺序,证明其全长为444bp,编码了18个氨基酸的信号肽和130个氨基酸的成熟蛋白组成的溶菌酶的前体蛋白,并证明已成功地在此cDNA的3′末端导入了两...
PCR检测伪狂犬病病毒DNA
伪狂犬病病毒 DNA检测 PCR
2007/12/19
摘要 根据伪狂犬病病毒 (PRV)gB基因的序列 ,设计并合成了一对引物 ,以闽A株细胞培养毒为模板 ,筛选最佳反应条件 ,建立了检测PRV的PCR方法 应用该方法对Fb、Bartha、BJ、GD、V2F4、S、S3、SR、Buk、Shope、Norden、MinkⅢ、HB、F8、F9、F12等毒株的细胞培养液进行基因扩增 ,均获得了分子量为 2 81bp的特异性目的DNA片段 ,而对Vero细...
RT-PCR测定组织纤溶酶原激活剂突变体(La-tPA)在转基因鼠乳腺表达的研究
Ｌａ－ｔＰＡ 转基因鼠 ＲＴ－ＰＣＲ 乳腺表达
2007/12/19
摘要 利用所构建的乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体（Ｌａ－ｔＰＡ）载体．对５４０枚小鼠受精卵进行显微注射，经ＰＣＰ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测，获得６只整合有人Ｌａ－ｔＰＡ转基因小鼠．为了精确研究转基因在小鼠体内的表达，采用ＲＴ－ＰＣＰ方法测定转基因鼠在泌乳期１～２０ｄＬａ－ｔＰＡ基因的转录，结果表明，在转基因鼠乳腺的Ｌａ－ｔＰＡｍＲＮＡ水平在１０～１５ｄ最高，在２０ｄ时降为最低．外源基因在转基...
摘要 用自行设计的TaqMan双标探针和扩增引物建立检测鸟苷酸结合蛋白(G-protein)mRNA的实时荧光定量RT-PCR技术.用G蛋白纯品绘制定量标准曲线,实时荧光定量PCR仪检测ECV304细胞和小鼠G蛋白mRNA水平.10μmol/LGqαmRNA反义寡核苷酸(GqαODN)作用ECV304细胞24h后,Gqα的mRNA表达显著下降(3.18×108±1.75×108拷贝下降到1.44×...
用DDRT-PCR技术克隆小鼠早期胚胎发育相关基因
mRNA差异显示RTPCR 反向Northern杂交 早期胚胎发育 总RNA
2007/12/19
摘要 mRNA差异显示 (DDRT PCR)技术在哺乳动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用 ,因获得足够量的早期胚胎材料困难而受到限制 .通过对DDRT PCR技术各种条件参数进行优化组合 ,并对某些环节进行改良 ,以小鼠的MⅡ卵、2 细胞胚胎和 4 细胞胚胎为材料进行差异显示 ,仅以相当于5 0个卵细胞的量为起始材料 ,便得到了理想的差示结果 .从差异条带中挑取感兴趣的差异条带进行回收、阳性...
山羊和奶牛具有非常相似的泌乳过程，但在产乳量和乳成分（脂肪和蛋白含量）之间存在很大的差异，而且山羊奶还具有特殊的膻味。本研究根据山羊和牛在基因编码序列上具有非常高的保守性原理，利用抑制消减杂交技术对3只西农萨能奶山羊和3头荷斯坦奶牛泌乳末期的乳腺组织进行差异表达基因分析。分别提取山羊和牛乳腺组织总RNA，分离mRNA并合成cDNA，以山羊乳腺组织cDNA作为测试，牛的乳腺组织cDNA作为对照。cD...
介绍一种PCR鉴定重组体DNA插入方向及转染的方法
重组体 鉴定 转染 ＰＣＲ
2007/12/18
摘要 介绍一种用ＰＣＲ方法鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及其是否导入细胞的方法．其原理是选择紧靠载体克隆位点上游的一段序列为上游引物，以扩增插入序列的上、下游引物分别作为下游引物进行ＰＣＲ．载体上游引物加插入序列的上游引物可扩出产物者为反向连接；加插入序列的下游引物可扩出产物者为正向连接．该法简单、快速，可广泛用于鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及基因转染时外源基因是否导入细胞内．
...
PCR扩增同源重组片段筛选转基因胚胎
转基因胚 同源重组 ＰＣＲ
2007/12/18
摘要 使用小鼠乳清酸蛋白基因（ＷＡＰ）启动子控制下的人集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）基因为显微注射片段，采用ＰＣＲ方法检测了转基因胚，为消除ＰＣＲ扩增中的假阳性结果，构建了两个具有部分同源性的亚克隆片段进行共注射．ＰＣＲ扩增片段跨越这一同源区域，仅当注射的片段能够整合并发生正常重组，转基因整合胚才能以相对高的比例扩增出特异性片段．结果表明，１、２和８细胞期的阳性率分别为１１．１％、５５．５％和４４．４...