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摘要 为建立一种新的SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR方法 ,使之能够有效消除引物二聚体 (PDs)对实时定量结果的影响 .对RT PCR特异性扩增产物和PDs分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析 .依据PDs和扩增产物的熔解温度 (Tm)特点 ,在通用的三步法的延伸步骤之后 ,增加一个短暂的 (5s)恒温和荧光检测步骤 ,使这个步骤的温度高于PDs的Tm,但低于扩增产物的Tm,简称该法为四...
摘要 建立竞争性 PCR方法 ,以期用于转录水平基因表达的定量研究 .以检测大鼠颅骨骨细胞总RNA中骨形态发生蛋白 - 2 ( BMP- 2 ,bone morphogenetic protein- 2 ) m RNA含量为例 ,构建大鼠BMP- 2基因的竞争模板 ,以之为内对照进行竞争性 PCR.PCR反应结束后 ,电泳、拍照 ,扫描所扩增条带密度 ,作回归方程 .根据回归方程 ,计算出正常 7...
改进竞争性RT-PCR法测定缺碘大鼠颅骨中BMP-2基因表达变化
碘缺乏 骨发育 RNA竞争模板 骨形态发生蛋白2
2007/12/21
摘要 为更加精确地测定碘缺乏状态下大鼠颅骨组织中骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )mRNA表达水平 ,改进竞争性RT PCR方法 ,探讨碘缺乏对骨骼发育影响的分子机制 .将构建的DNA竞争模板克隆入pSportⅠ质粒中 ,利用pSportⅠ质粒中所含有的SP6RNA聚合酶启动子序列 ,将DNA竞争模板在体外转录成为RNA .以此RNA作为竞争性RT PCR中的竞争模板 ,与所提取的总RNA一同...
RT-PCR法扩增的人溶菌酶cDNA的克隆及其核苷酸顺序分析
胎盘 溶菌酶 逆转录-聚合酶链反应 分子克隆 核苷酸顺序
2007/12/19
摘要 本文以人胎盘全RNA为底物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),制备出了人溶菌酶的cDNA片段。在限制性内切酶Sma Ⅰ存在的连接体系内,将此cDNA克隆入载体pUC12的Sma Ⅰ位点。用重组质粒双链DNA的末端终止法测定了其全部的核苷酸顺序,证明其全长为444bp,编码了18个氨基酸的信号肽和130个氨基酸的成熟蛋白组成的溶菌酶的前体蛋白,并证明已成功地在此cDNA的3′末端导入了两...
RT-PCR测定组织纤溶酶原激活剂突变体(La-tPA)在转基因鼠乳腺表达的研究
Ｌａ－ｔＰＡ 转基因鼠 ＲＴ－ＰＣＲ 乳腺表达
2007/12/19
摘要 利用所构建的乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体（Ｌａ－ｔＰＡ）载体．对５４０枚小鼠受精卵进行显微注射，经ＰＣＰ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测，获得６只整合有人Ｌａ－ｔＰＡ转基因小鼠．为了精确研究转基因在小鼠体内的表达，采用ＲＴ－ＰＣＰ方法测定转基因鼠在泌乳期１～２０ｄＬａ－ｔＰＡ基因的转录，结果表明，在转基因鼠乳腺的Ｌａ－ｔＰＡｍＲＮＡ水平在１０～１５ｄ最高，在２０ｄ时降为最低．外源基因在转基...
摘要 用自行设计的TaqMan双标探针和扩增引物建立检测鸟苷酸结合蛋白(G-protein)mRNA的实时荧光定量RT-PCR技术.用G蛋白纯品绘制定量标准曲线,实时荧光定量PCR仪检测ECV304细胞和小鼠G蛋白mRNA水平.10μmol/LGqαmRNA反义寡核苷酸(GqαODN)作用ECV304细胞24h后,Gqα的mRNA表达显著下降(3.18×108±1.75×108拷贝下降到1.44×...
山羊和奶牛具有非常相似的泌乳过程，但在产乳量和乳成分（脂肪和蛋白含量）之间存在很大的差异，而且山羊奶还具有特殊的膻味。本研究根据山羊和牛在基因编码序列上具有非常高的保守性原理，利用抑制消减杂交技术对3只西农萨能奶山羊和3头荷斯坦奶牛泌乳末期的乳腺组织进行差异表达基因分析。分别提取山羊和牛乳腺组织总RNA，分离mRNA并合成cDNA，以山羊乳腺组织cDNA作为测试，牛的乳腺组织cDNA作为对照。cD...
应用RT-PCR检测基因的体外转录活性
体外转录 ＲＴ－ＰＣＲ 基因转录调控
2007/12/18
摘要 体外转录分析已广泛应用于分子生物学领域．由于体外转录所产生的ＲＮＡ的量极少，需有灵敏的方法检测生成的ＲＮＡ．本研究发展了一种基于ＲＴ－ＰＣＲ技术鉴定体外转录产物的方法．将待研究基因的启动区与任何一段已知的含转录起始位点的编码序列相连，制备成体外转录的模板．体外转录后，用ＤＮａｓｅⅠ将ＤＮＡ模板完全降解；生成的ＲＮＡ经反转录合成ｃＤＮＡ；再以ｃＤＮＡ为模板，用相应的引物进行ＰＣＲ扩增，产物用琼...
LDL受体基因cDNA的RT-PCR分离、克隆及其在RFLP中的应用
RFLP
2007/12/17
摘要 利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分离低密度脂蛋白受体基因ｃＤＮＡ，将长为２６０５ｂｐ的ｃＤＮＡ插入质粒ｐＪＮ６，并经全序列测定证实，该序列与已报道序列相比，存在两个变异碱基，即第７５４位Ｃ→Ｔ，和１６５４位的Ｇ→Ａ，这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸，利用ＬＤＬ受体基因ｃＤＮＡ中的ＣｌａⅠ片段作为探针，检测到ＬＤＬ受体基因上外显子８的ＳｔｕⅠ位点是个限制性片段长度多态性位点。所克隆的ｃＤＮＡ含有可译框架...
题目：TaqMan 荧光定量RT-PCR 检测犬瘟热病毒方法的建立与初步应用
作者：吕品, 胡传伟, 谢之景, 杨笃宝, 任月
山东农业大学动物科技学院,泰安271018
关键词：荧光定量RT-PCR;TaqMan 探针;犬瘟热病毒;M 基因
通讯作者：谢之景 (E-mail:xiezhijing@sohu.com).
题目：近江牡蛎Hsc70蛋白基因cDNA片段的克隆及Southern杂交和RT-PCR分析
作者：张其中吴信忠 高劲松 潘金培
中国科学院南海海洋研究所，广州
关键词：近江牡蛎 70 kDa热休克蛋白基因 cDNA序列 Southern杂交 RT-PCR
通讯作者：吴信忠 (E-mail:wuxinz@public.guangzhou.gd.cn).
中华鳖7种组织SOX基因表达的RT-PCR分析
中华鳖 RT-PCR序列分析 基因表达
2007/8/5
题目：中华鳖7种组织SOX基因表达的RT-PCR分析
作者：聂刘旺单祥年汪 鸣郭超文鲁晓萱
安徽师范大学生命科学学院,安徽芜湖
关键词：中华鳖RT-PCR序列分析基因表达
鸡新城疫病毒强弱毒株RT-PCR鉴别诊断方法
2007/7/28
专著信息
书名
鸡新城疫病毒强弱毒株RT-PCR鉴别诊断方法
语种
中文
撰写或编译
作者
曹殿军,刘培欣,闫丽辉,孙建宏
第一作者单位
出版社
中国预防兽医学报, 2000,22(6) ：415-417
出版地
出版日期
2000年
月
日
标准书号
介质类型
页数
字数
开本
相关项目
我国鸡新城疫病原生态学和分子流行病学的研究
定量竞争RT-PCR快速评价RNA干扰芳香烃受体基因的沉寂
2007/7/28
期刊信息
篇名
定量竞争RT-PCR快速评价RNA干扰芳香烃受体基因的沉寂
语种
中文
撰写或编译
作者
赖延东,李秀英,宾晓农,吕嘉春
第一作者单位
刊物名称
中华预防医学杂志（待发）
页面
出版日期
年
月
日
文章标识(ISSN)
相关项目
芳香烃受体(AhR)介导二恶英致癌机制的研究