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斑马鱼VEGF基因的siRNA表达载体构建、有效序列筛选及其对基因表达的干预性研究
RNA干扰(RNA interference) 斑马鱼(Zebrafish) 血管生成(Vascular development) 血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor)
2008/3/5
为探索小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）表达质粒在研究斑马鱼血管内皮生长因子（vascu1ar endothelial growth factor, VEGF）基因调控网络中的应用，构建了4个以斑马鱼VEGF基因为靶点的siRNA表达载体pS1-VEGF、pS2-VEGF、pS3-VEGF及pS4-VEGF。通过显微注射的方法将载体导入1-2细胞期斑马鱼体内，...
摘要从真菌藻状菌纲Achlyabisexualis的cDNA文库中克隆了糖酵解途径的最后一种酶—丙酮酸激酶的基因,获得这个基因的完整阅读框架,并且对这个基因的全序列进行了测定。使用在线计算机PSORTⅡ程序分析推导的氨基酸序列,发现此基因编码的丙酮酸激酶可能位于Achlyabisexualis的细胞质中。结果表明,在低等真核细胞的糖酵解途径的整个过程可能发生在细胞质中,与Liaud等人[1]在硅藻...
从小鼠胎儿基因文库中筛选分离免疫球蛋白重链Cε基因
免疫球蛋白重链Cε基因 小鼠胎儿基因
2008/2/3
摘要本文阐述了以缺口翻译制备的pIgB DNA为探针(4.4×10 4 cpm/μg DNA),用吸印法从小鼠儿基因文库中筛选分离出免疫球蛋白重链Cε基因克隆。同时，从扩大培养的噬菌体中提取出DNA，并用EcoRI酶消化，0.7%琼脂糖凝胶平板电泳分离，分离的DNA片段转移至硝酸纤维素滤膜上，以pIgB DNA探针杂交，进而确证有两条阳性带，为免疫球蛋白重链Cε基因。电泳法测定其大小分别约为3.5...
摘要一个从cosmid分子克隆库中筛选特别基因顺序的遗传学方法——体内同源重组(invivo homo logous recombination)法。即使探针DNA与分子克隆库中带有与探针同源顺序的克隆发生体 内重组，然后以遗传学方法进行筛选。cosmid分子克隆库构建在rec-宿主细胞内，经体内包 装(in vivo Packaging)成λ噬菌体颗料，把该噬菌体颗粒，把该噬菌体颗粒转入带有探针...
中国人HLA纯合细胞的筛选及纯合性鉴定
主要组织相容性复合体 HLA分型 纯合分型细胞
2008/2/3
摘要本文报告了我们实验室在中国人中筛选HLA纯合子的方法和筛选流程。用HLA血清学分型法，从上海129个近亲婚配家庭中筛选到HLA-AB纯合子23个（分布于17个家庭）。其中19个HLA-AB纯合子（分布于14个家庭）进一步做了家系MLC棋盘。最终证明，它们中14个细胞（分布于10个家庭）的HLA-D位点也纯合。
摘要S-(2-氨乙基)-L-半胱氨酸(AEC)可抑制芦笋愈伤组织的生长，此抑制作用可被赖氨酸或甲硫 氨酸部分解除。用0.5mmol/L的AEC进行筛选，得到抗性愈伤组织AR10并再生植株。AR10愈伤 组织经一年多的继代培养，在离开选择剂组培继代两代后仍保持对AEC的抗性。抗性系愈伤 组织还表现出对2mmol/L的半胱氨酸具交叉抗性，对1mmol/L的赖氨酸加苏氨酸表现部分交叉 抗性。AR10再生...
摘要经实验我们成功地建立了在细胞水平上筛选烟草抗黑胫病突变体的筛选体系。该体系的主要 内容为：γ-射线500-2000拉德诱变高度感病品种的花药后用50-80%的黑胫病菌粗毒素为选 择压力，筛选出抗毒素花粉植株，用离体叶片法测定选出抗病植株，再从后代鉴定中选出抗 病性能够稳定遗传的突变系。γ-射线及高浓度毒素处理均能得到抗病植株。选自感病品种 的花粉植株中约有9-50%是真正抗病的。这些抗病植株中...
摘要哺乳类脑组织有着极其复杂和众多的基因表达，许多遗传性神经退行性疾病起源于不同的脑 功能区域的基因表达缺陷。分离和筛选小脑特异表达基因是认识小脑疾病的重要途径。本文 采用递减杂交法，大脑前皮层和肝组织单链cDNA为驱动物与小脑双链cDNA进行乳化酚杂交， 经过重组噬菌体λgt11 DNA连接选择，特异性地克隆那些仅在小脑中优势表达的cDNA。杂交 后的小脑cDNA文库容量仅是起始文库容量的0.0...
体细胞克隆胚胎类ES细胞集落的筛选及其核移植
牛体细胞 克隆胚胎 类ES细胞 核移植
2008/2/2
摘要对第7天的牛体细胞克隆囊胚进行体外增殖培养，分离筛选类ES细胞，并对其进行了传代培养。接种在饲养层上的体细胞克隆囊胚细胞，在传代的24 h内增殖形成小集落，2~3 d有雀巢状的集落出现，筛选形态相同的细胞集落进行传代培养，4~5代后，皿底出现多个大小不等的多细胞单层集落。将传4~5代的细胞集落接种到无饲养层的四孔培养皿中培养，24 h出现多细胞单层集落，4~7 d长满皿底，并形成上皮样细胞，呈...
利用细胞工程技术筛选小麦抗根腐病突变体的研究
小麦根腐病菌抗病突变体 离体筛选
2008/2/1
摘要以小麦根腐病菌002号菌株产生的致病培养滤液为选择剂，选用春、冬小麦品种、品系以及 杂种的花药和幼穗进行离体培养，并结合物理诱变技术，已获得抗根腐病的植株，用根腐病 菌分生孢子接种鉴定，再生植株50株中有12株抗病。
摘要运用基因组步行方法克隆盐藻肌动蛋白基因5ˊ上游调控序列，发现相对于ATG上游-573和-424 bp的位置上分别有75 bp长的两个重复序列。没有典型的TATA盒，但有两个TATA样结构、一个CCAAT结构和一个与GCTC(G/C)AAGGC一致的序列。以700 bp的盐藻肌动蛋白基因启动子区序列驱动bar基因的表达作为转化盐藻的筛选标记。转化的藻细胞暗光恢复24 h后，在含0.5μg/mL除...
人基因组YAC分子克隆库的构建及DMD基因YAC克隆的筛选
酵母人工染色体 类基因组 X染色体 DMD基因
2008/1/31
摘要以pYAC4为载体，以正常人白细胞和含4条X染色体的细胞体GM1414为DNA源构建成人基因 组YAC (Yeast Artificial Chromosome, 酵母人工染色体)分子克隆库，已得到原始克隆近2 万个，插入DNA片段长度在400—1000kb，从其中选出一组YAC克隆，它们含有DMD基因全部DN A顺序。
植物遗传工程 二、突变和突变体的筛选
筛选 突变体 突变
2008/1/31
植物细胞和植物系统的突变体可以分为两大类：一类是可用选择系统回收的突变体；一类是不能用选择系统回收的自发突变体。这里，我们只讨论第一类。在细菌中，可以利用正选择系统和负选择系统回收突变体；在植物系统中，情况也如此。
摘要 通过对国内外水稻品种种子的全蛋白分析，筛选到3个谷蛋白突变材料。其中编号W3660种子中37～39 kDa与22～23 kDa谷蛋白亚基的含量较普通水稻明显降低，而13 kDa醇溶蛋白多肽含量则大幅升高；W204和W379种子中37～39 kDa与22～23 kDa谷蛋白亚基的含量介于普通品种与W3660之间，W379还具超大含量的57 kDa多肽，实验证明此多肽属谷蛋白成分。用W3660和...
摘要用DNA-蛋白质体外结合实验和凝胶迁移率变动分析技术筛选黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）木质素过氧化物酶基因lipA、lipC、lipF的5′-端调控区内能与该菌在木质素降解条件下形成的蛋白特异结合的顺式作用元件。结果表明，来自lipC、lipF基因的5′-端片段LG2P3(396 bp)和 LG6S1-2（738 bp）能特异结合培养于Kirk低氮培养...