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摘要以抗白粉病品系"百农3217×Mardler" BC5F4为材料,构建了白粉病菌诱导的普通cDNA文库和抑制消减杂交(SSH) cDNA文库.分别对两文库进行了一定规模的测序,获得普通cDNA文库不重复ESTs 387条和SSH cDNA文库ESTs 760条.将获得的ESTs与GenBank序列进行了BLASTn、BLASTx同源性分析.结果表明:在普通文库中,一些参与光合作用与核糖体构成等...
应用体内诱导抗原技术筛选结核分枝杆菌体内表达基因
结核分枝杆菌 体内诱导抗原技术 药物靶标 毒力
2008/1/26
摘要为寻找新型抗结核药物靶标，采用体内诱导抗原技术筛选结核分枝杆菌的体内诱导基因。首先构建了结核分枝杆菌基因组质粒表达文库，库容量为1.02×105CFU。再用经过结核分枝杆菌和大肠杆菌的裂解产物吸附过的结核病人血清，通过原位免疫印迹来筛选基因组表达文库，共获得16个阳性克隆。对阳性克隆进行测序和生物信息学分析，发现该16个阳性克隆可能包含22个开放阅读框（ORF）。按照功能将其分为7类基因：脂类...
摘要利用抗黄矮病小麦-中间偃麦草易位系HW642的细胞核DNA构建了一个可转化人工染色体(transformation-competent artificial chromosome,TAC)文库,文库由2.3×106克隆构成,重组率为90.48%,平均插入片段大小为22kb左右,约覆盖普通小麦单倍体基因组2.5倍,在该文库中分离得到单拷贝DNA序列的几率约是95.77%.文库保存在24块96孔板...
XNP基因内多态基因座筛选及其多态性分析
X连锁核蛋白基因 短串联重复序列 遗传多态 Hardy-Weinberg平衡
2008/1/26
摘要从XNP基因内部筛选多态性较强的多态基因座,为连锁分析和间接诊断奠定基础通过核酸同源性分析获得含有XNP基因的基因组克隆,并通过对比分析cDNA与基因组DNA的对应关系确定基因的非外显子序列,利用BCMSearch Launcher程序从中筛选短串联重复序列。采用PCR扩增技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对所筛选出的短串联重复序列进行多态性分析。结果从XNP基因内筛选出5个短串联重复序列。多态性...
利用细胞工程技术筛选小麦抗病新种质的研究
细胞工程技术 抗病突变株 抗病新种质
2008/1/23
在利用细胞工程技术筛选小麦抗根腐病和赤霉病突变体研究工作的基础上, 将已获得的突变株继续进行多年多点的抗病鉴定,对突变株后代的抗病性进行测定,并对农艺性状作详细的观察。结果表明,抗病突变株不论是同一年份在不同鉴定点上, 还是在同一鉴定点上多年重复鉴定,都表现有较强的抗根腐病菌和赤霉病菌侵染的能力,突变株的抗病性不因代数的增加而发生变化。已从中选出4个对根腐病和赤霉病抗性强而稳定、农艺性状亦较好的新...
Frankia 基因文库的构建及与根瘤菌结瘤基因区同源克隆的筛选
Frankia 基因文库 结瘤基因
2008/1/21
摘要应用无色肽酶(Achromopeptidase)加溶菌酶系统破壁，提取分别来自色赤杨、细技术麻黄和 沙棘的3株代表性Frankia菌株的总DNA。以可在很多革兰氏阴性细菌中稳定复制和诱动转移 的广谱寄主性质粒pLAFR1为载体，构建了其基因组文库。基于经EcoRI酶切后的Frankia总DN A中有与根瘤菌结瘤基因同源性的片段，以豌豆根瘤菌结瘤基因为探针，通过菌落原位杂交 对文库进行了筛选，较...
用酵母双杂交系统筛选与痢疾杆菌侵袭素IpaC相互作用的蛋白
痢疾杆菌 酵母双杂交系统 IpaC 胶原酶
2008/1/21
摘要
利用酵母双杂交技术筛选与IpaC相互作用的真核细胞蛋白。首先将IpaC全长基因克隆到诱饵蛋白载体pGBKT7中，然后以构建的pGBKT-IpaC为靶蛋白质粒，筛选人HeLa细胞cDNA文库。在2×106个克隆中得到22个阳性克隆。其中2个阳性克隆编码人胶原酶蛋白片段。并且进一步证明与胶原酶片段相互作用的IpaC结构域在62aa～170aa之间。从而提示IpaC可能在胶原酶参与的生物学过程...
G418抗性筛选标记在酵母体系中的应用
2007/12/19
摘要 G118是一种氨基苷类抗菌素衍生物,对原核和真核细胞均有毒性作用,能阻断细胞内蛋白质合成。将G418抗性neo基因引入细胞后,neo基因即能编码产生氨基糖苷类3’-磷酸转移酶Ⅰ,它能失活几种不同的2-脱氧链霉氨基糖苷类抗菌素,使其在3’羟基部位磷酸化,
应用酵母双杂交系统筛选新基因Collectrin相关蛋白
collectrin 酵母双杂交系统 蛋白间相互作用
2007/12/19
摘要 Collectrin是在小鼠 5 6肾切除后 ,在肾小球的高滤过、高增生期分离克隆的一个新基因 .通过酵母双杂交系统从人肾脏cDNA文库中筛选与collectrin相互作用的蛋白 ,可以为该基因的功能研究提供线索 .构建collectrin的真核表达载体collectrin pGBKT7 c myc ,转化酵母菌AH10 9.Western印迹证实 ,collectrin蛋白能够在酵母中正...
山羊和奶牛具有非常相似的泌乳过程，但在产乳量和乳成分（脂肪和蛋白含量）之间存在很大的差异，而且山羊奶还具有特殊的膻味。本研究根据山羊和牛在基因编码序列上具有非常高的保守性原理，利用抑制消减杂交技术对3只西农萨能奶山羊和3头荷斯坦奶牛泌乳末期的乳腺组织进行差异表达基因分析。分别提取山羊和牛乳腺组织总RNA，分离mRNA并合成cDNA，以山羊乳腺组织cDNA作为测试，牛的乳腺组织cDNA作为对照。cD...
酵母双杂交系统筛选CLN8P相互作用蛋白
酵母双杂交技术 神经元蜡样脂褐质沉积症 CLN8 蛋白质相互作用
2007/11/5
摘要 目的：应用酵母双杂交系统筛选CLN8P相互作用蛋白质，通过对相互作用蛋白质的筛选及研究，探讨CLN8的功能，为NCL8和NCLs疾病群的发病机制研究提供线索，并为疾病的蛋白质相互作用网络提供资料。方法 应用酵母双杂交技术，以pLexA-CLN8为诱饵质粒筛选人胎脑cDNA文库，得到Leu+LacZ+阳性克隆，进一步进行验证，并对验证后的阳性克隆的外源性片断进行测序及同源性分析。结果 从人胎脑...
一种筛选微卫星位点的改进方法及其在小熊猫微卫星基因文库构建上的应用
微卫星 基因组文库 筛选 小熊猫
2007/10/31
摘要：微卫星（Simple Sequence Repeat,SSR）基因位点是在各个遗传学领域被广泛使用的分子标记。而对于首次研究的物种，必须筛选出可以应用的微卫星位点。对于分离微卫星位点来说由于只有大约0.5％-2%的重组体含有微卫星位点，所以标准的基因组文库需要至少产生5 000个重组体。传统的筛选方法就是通过检测大量重组体来定位这些少量的位点。近几年来出现了一些新的筛选方法，采用“富集”微卫...
用RNAi筛选Hedgehog基因
2007/10/9
用RNAi筛选Hedgehog基因
发布日期：[2003.4.4]
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出自：http://www.biosino.org
利用一种阻断特异RNA产生蛋白质的...
一株环己酮高效降解菌株的筛选及鉴定
环己酮 生物降解 16S rRNA基因序列 赤红球菌(Rhodococcus ruber)
2012/11/20
自岳阳巴陵石化公司环己酮生产车间总出水口污泥中分离得到一株能快速降解环己酮的菌株，菌号为JDM-3-11.通过形态观察、生理生化特征检测和基于16S rRNA基因序列的系统发育分析，初步鉴定其为赤红球菌（Rhodococcus ruber）的一个菌株.当环己酮的质量浓度为2 000 mg/L时，在温度为30 ℃，转速为150 r/min，pH值为7的条件下，70 h内该菌株对环己酮的降解率达到94...
筛选差别表达基因的方法及其应用新进展
差别基因表达 大量平行测序技术
2007/8/5
摘要：筛选差别表达基因是进行生物个体生长、发育调控和病理等研究工作的关键步骤之一,对基因组学、蛋白质组学以及更深层次的生命科学研究都具有重要意义.目前,筛选差别表达基因常用的方法主要有DDRT-PCR、SSH、SAGE和基因芯片等方法.本文就这些方法最新的应用进展进行了综述,并重点介绍了近年问世的Megaclone、Megasort和MPSS等新方法.