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南开大学团队发现“擦亮”基因筛选利器（图）
胚胎干细胞 南开大学 基因筛选
2023/7/4
单倍体胚胎干细胞自问世以来，为正向遗传学筛选提供了非常优秀的平台，被广泛应用于各种病毒受体、药物靶点、生物发育现象等关键调控基因的筛选。然而，其在日常培养和分化过程中，常常会发生二倍化现象，严重影响其发挥“基因筛选利器”的功能。如何从根本上抑制二倍化，高效维持单倍体胚胎干细胞的单倍性成为干细胞研究领域的重要课题。
近年来，CRISPR-Cas9技术介导的突变筛选在小鼠和人细胞中已被广泛应用，而实现高效的小鼠个体水平遗传筛选对哺乳动物功能基因组研究具有重要意义。
肌球蛋白是肌肉细胞的重要组成成分，影响肌纤维的组成和肌肉生长。为了研究肌球蛋白重链（MYH）基因多态性与大口黑鲈生长性状的相关性，本研究采用PCR技术扩增得到编码区序列全长为9759 bp的大口黑鲈MYH基因，该基因包含37个外显子和36个内含子，编码1940个氨基酸。采用直接测序法在MYH基因上筛选到8个单核苷酸多态性标记（SNP）位点（A-305G、G-558C、A-2784C、A-2816G...
针对核质运输的高通量小分子筛选方法
核质运输 高通量筛选方法 NZGFP/CZGFP Leptomycin B
2012/8/6
核质运输是真核细胞的重大基本生命活动。核质运输小分子抑制剂不仅可以广泛应用并促进核质运输相关的基础研究, 同时也为相关疾病、尤其是病毒性疾病的药物开发提供有利线索。然而, 目前针对核质运输的商业化小分子仅有Leptomycin B一种。建立一个针对整个核质运输通路的小分子筛选平台, 将有利于筛选与获得多种干扰核质运输的小分子。文章利用NZGFP和CZGFP可以重组为具有荧光GFP的特性, 构建NZ...
在已知中国美利奴羊MHC(Major histocompatibility complex)区段BAC(Bacterial artificial chromosome)克隆序列信息和预测的基因注释前提下, 用位于中国美利奴羊基因组BAC文库MHC区段的6个BAC克隆酶切片段为探针, 以噬菌斑原位杂交筛选法筛选中国美利奴羊混合组织cDNA文库(库库杂交), 对分离到的cDNA阳性克隆进行全序列测定,...
黑斑狗鱼部分基因组文库构建和微卫星位点的筛选(英文）
黑斑狗鱼 微卫星 磁珠富集
2009/6/23
采用磁珠富集与放射性杂交相结合的方法开发黑斑狗鱼（Esox reieherti Dybowski）基因组微卫星资源。基因组DNA 经Sau 3AⅠ限制性内切酶消化后，选取400―900 bp的片段进行PCR全基因组扩增，并利用生物素标记的（CA）12、（GA）12 探针进行微卫星片段的富集。将得到的片段与pGEM-T载体连接后转入DH5α大肠杆菌中，然后利用γ-32 P标记的放射性同位素探针进行第...
家蚕耐氟基因RAPD分子标记的筛选及其克隆
家蚕 近等基因系 耐氟性 RAPD标记
2009/6/23
以家蚕耐氟品种T6和高敏感品种733新为材料，并构建其近等基因系，采用300个随机引物进行RAPD扩增，获得了与家蚕耐氟性有关的一个分子标记S207，并在F[2]代分离个体中得到验证，证明了此分子标记的可靠性，进而将此标记克隆进T载体pUCm-T中，完成了测序，分析发现此序列是新的未有报道的序列。计划下一步将此RAPD标记转化成SCAR标记，建立分子标记辅助育种技术体系。
牙鲆CA/GT微卫星标记的筛选(英文)
微卫星标记 生物素选择杂交法 同位素标记杂交法
2009/6/22
采用生物素选择杂交法与放射性同位素杂交法相结合的技术，成功地从牙鲆(Paralichthys olivaceus)基因组中分离出含有CA/GT重复类型的微卫星序列。通过两轮淘选，共获得526个阳性菌落。测序其中的119个菌落，结果获得133个含有微卫星座位的序列。除了两个复合型微卫星外(1.5%)，完美型63个(47.37%)，非完美型68个(51.13%)。设计并合成22对微卫星引物，对8个人工...
从噬菌体文库中筛选与表皮生长因子结合的多肽(英)
噬菌体展示 多肽 表皮生长因子 药物靶分子
2008/9/26
与许多疾病相关的血管生成作用是由一些血管生成因子介导的，其中就包括表皮生长因子.在肿瘤生长、关节炎等疾病中，表皮生长因子参与了其中的血管生成作用，拮抗表皮生长因子介导的血管生成就有可能对与其相关的疾病起到治疗作用，因此，表皮生长因子的拮抗剂可能具有重要的临床价值.拮抗表皮生长因子的作用可以通过许多途径，其中之一就是找到能与表皮生长因子结合并能干预其与受体结合的分子，因而表皮生长因子可作为药物靶分子...
高产人参寡糖素培养细胞变异克隆系的筛选
人参 寡糖素 变异克隆系 过氧化物酶同工酶
2008/3/17
用2mmol/L的MNNG处理经过滤的人参悬浮培养细胞1小时后，细胞存活率下降显著，细胞克隆植板率只是对照组的10.12%。经细胞平板克隆共获得克隆系151株，其中很多克隆系在转移培养中生长缓慢，甚至不生长而死亡。经分析可供测定的克隆系生长和寡糖素含量的差异，对11株寡糖素含量较高克隆系经连续10代继代培养观察，选出一株稳定高产人参寡糖素优良克隆系PGMB－37，其平均生长速率是0.558gDWL...
摘要一个从cosmid分子克隆库中筛选特别基因顺序的遗传学方法——体内同源重组(invivo homo logous recombination)法。即使探针DNA与分子克隆库中带有与探针同源顺序的克隆发生体 内重组，然后以遗传学方法进行筛选。cosmid分子克隆库构建在rec-宿主细胞内，经体内包 装(in vivo Packaging)成λ噬菌体颗料，把该噬菌体颗粒，把该噬菌体颗粒转入带有探针...
中国人HLA纯合细胞的筛选及纯合性鉴定
主要组织相容性复合体 HLA分型 纯合分型细胞
2008/2/3
摘要本文报告了我们实验室在中国人中筛选HLA纯合子的方法和筛选流程。用HLA血清学分型法，从上海129个近亲婚配家庭中筛选到HLA-AB纯合子23个（分布于17个家庭）。其中19个HLA-AB纯合子（分布于14个家庭）进一步做了家系MLC棋盘。最终证明，它们中14个细胞（分布于10个家庭）的HLA-D位点也纯合。
摘要 通过对国内外水稻品种种子的全蛋白分析，筛选到3个谷蛋白突变材料。其中编号W3660种子中37～39 kDa与22～23 kDa谷蛋白亚基的含量较普通水稻明显降低，而13 kDa醇溶蛋白多肽含量则大幅升高；W204和W379种子中37～39 kDa与22～23 kDa谷蛋白亚基的含量介于普通品种与W3660之间，W379还具超大含量的57 kDa多肽，实验证明此多肽属谷蛋白成分。用W3660和...