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常见耐药基因多重PCR方法的建立及用于禽致病性大肠杆菌耐药性监测
耐药基因 多重PCR 检测
2021/3/9
本研究旨在建立β-内酰胺类、四环素类、氨基苷类、酰胺醇类、磺胺类抗菌药物耐药基因的多重PCR检测方法，用于耐药基因的快速检测。根据GenBank公布的上述5类抗菌药物的耐药基因序列，设计17对特异性引物。通过优化PCR体系和反应程序，建立4组耐药基因（cat+floR+tetB+tetC；dfrA12+sul2+sul1+blaCTX-M+balTEM-1；aac3+aph3+aadA1+strB...
7种食源性致病菌GeXP多重PCR检测方法的建立及其应用
食源性致病菌 GeXP 多重PCR 特异性嵌合引物
2021/3/11
本研究旨在建立一种能够同时鉴别包括大肠杆菌O157：H7、沙门菌、空肠弯曲菌、单核细胞增生李斯特菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌7种常见食源性致病菌的GeXP多重PCR检测方法。根据这些致病菌在GenBank上公布的保守基因序列，设计合成了7对特异性GeXP引物。用单一或混合细菌样品的DNA模板优化反应条件，设置对照组，构建重组质粒，随机组合不同浓度的样品，验证所建立的GeXP方法的特异性...
猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重荧光定量PCR检测方法的建立
猪肺炎支原体 猪鼻支原体 双重荧光定量PCR
2017/8/22
建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物，分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针，建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系，同时检测其敏感性、特异性和重复性。建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10 copies·μL-1；与猪源致病菌、病毒和其他常见...
Mycobacterium avium subsp. hominissuis infection in two sibling Fjord horses diagnosed using quantitative real time PCR: a case report
Mycobacterium avium complex mycobacteriosis qPCR IS1245 zoonosis
2015/4/15
This report describes new possibilities for intravital and post mortem diagnosis of avian mycobacteriosis in horses using the quantitative real time PCR (qPCR) method. Using this method, Mycobacterium...
Diagnostics of main bacterial agents of porcine respiratory diseases complex (PRDC) using PCR detection of Mycoplasma hyopneumoniae
pigs Pasteurella multocida Actinobacillus pleuropneumoniae
2015/2/5
The main goal of our work is the presentation and analysis of incidence of porcine respiratory disease complex (PRDC) regarding bacterial agents in the territory of northern districts of Slovakia. Myc...
根据GenBank 登录的水貂肠炎病毒（ＭＥＶ）ＶＰ２ 蛋白基因的保守序列设计了１ 对特异性引物，经ＰＣＲ 扩增出１４６ ｂｐ 的目的片段，并克隆到ｐＭＤ １８ － Ｔ 载体上，提取重组质粒经ＰＣＲ 及测序鉴定正确后，以１０ 倍梯度稀释质粒作为阳性标准品，绘制荧光定量标准曲线，以此建立一种基于ＳＹＢＲ Green 荧光染料的定量ＰＣＲ 特异性检测水貂肠炎病毒的方法。结果表明：该方法对ＭＥＶ 有很好...
空肠弯曲菌是世界卫生组织列为最常见食源性传染病菌之一的人兽共患病原菌，传统的分离鉴定方法需要耗费大量工时，并存在敏感性低、难以检出非可培养状态细菌和易出现假阴性结果等问题。本研究首创了空肠弯曲菌的磁捕获-荧光PCR快速检测方法，无需增菌培养即可直接捕获检样中的弯曲菌，利用实时荧光PCR进行鉴定，可在24h内完成检测，检测低限达到10cfu/mL，提高了非可培养状态空肠弯曲菌的检出率。
牛主要病毒病核酸探针及PCR系列诊断研究
牛 病毒病核酸 探针
2008/10/17
该项目根据牛主要病毒病的主要病原包括病毒性腹泻病毒（BVDV）、狂犬病病毒（RV）、口蹄疫病毒（FMDV）的已经发表的基因组序列，结合各种病毒基因组结构特点以及相关资料，选取了各自基因组的特异性核酸片段，设计合成了特异引物，按着碱基配对原则，核酸DNA杂交技术和体外DNA扩增技术，建立了核酸探针和多联RT-PCR诊断方法，达到一次实验操作可同时诊断三种牛主要病毒病的目的，这对牛病毒病的诊断和防制...
参照GenBank发表的序列，在金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌16S rRNA 与23S rRNA之间的区域设计了3对引物，参照念珠菌和隐球菌的18S rRNA的序列设计1对引物，建立了检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺炎主要致病菌的多重PCR方法。参照Skladny的方法制备模拟了细菌感染临床标本。结果表明：本试验建立的多重PCR方法具有较好的特异性，多重PCR...
牛尿苷酸合酶缺乏症PCRRFLP检测方法的研究
荷斯坦奶牛 DUMPS PCR-RFLP
2008/4/22
本研究通过PCR-RFLP建立了直接利用基因组DNA检测尿苷酸合酶缺乏症（DUMPS）突变的方法。对济南市6个奶牛场224头奶牛及53头荷斯坦种公牛进行了DUMPS的PCR-RFLP检测，共检出2头杂合母牛（携带者），杂合子占检测母牛群的0.89%，在荷斯坦公牛中只检测到一种基因型，没有发现隐性突变基因的携带者。实验证明，该方法重复性好、灵敏性高、稳定性可靠。
在已经建立的猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）、猪多杀性巴氏杆菌（PM）、副猪嗜血杆菌（HPS）的单项PCR诊断方法的基础上，通过对扩增条件的筛选，成功地建立了APP、PM、HPS复合PCR诊断方法，并应用于临床。利用一次PCR反应，即可同时扩增APP的342bp、PM的457bp和HPS的821bp的特异性片段。该方法的建立对临床上进行这3种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。
实时荧光定量PCR构建绵羊PrP基因标准品质粒和标准曲线。
实时荧光定量PCR构建绵羊PrP基因标准品质粒和标准曲线。