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用差异显示反转录PCR银染技术研究植物基因表达的差异
差异显示反转录PCR 银染 拟南芥 ast突变型
2008/6/12
通过调整差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量，优化了适用于银染检测的DDRT-PCR方法.PCR扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后，银染能检测到多而清晰的条带.泳道中的条带数最少为40个，最多达80个，平均为60个，条带大小分布在100～900 bp范围，灵敏度为5 pg/mm2 .此方法操作简便快速，灵敏度...
摘要 为寻找纤维化形成中调控人Ⅰ型前胶原基因高水平转录的启动序列及其DNA结合蛋白 ,以人皮肤成纤维细胞α1(Ⅰ )前胶原基因转录起始点上游 - 2 5kb至 + 4 2bp的片段为靶序列 ,采用PCR、基因重组、报告基因测活、细胞基因转染技术比较不同长短启动子活性 .凝胶滞留实验 (EM SA)研究高启动活性片段相应的DNA结合蛋白 .基因转染高活性转录因子识别序列至靶细胞 ,探讨前胶原基因激...
人成纤维细胞转录因子Sp1Sp3对p16~(INK4a)基因的调控
人成纤维细胞转录因子Sp1Sp3 人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS) 电泳迁移率变动分析(EMSA) 细胞周期蛋白依赖激酶(cdk)
2007/12/24
摘要 p16 INK4a是一种细胞周期蛋白依赖激酶 (cdk)的抑制因子 ,它通过抑制cdk4与cdk6的活性 ,使视网膜母细胞瘤抑制蛋白Rb处于低磷酸化状态 ,从而使细胞阻滞于G1期 .对p16 INK4aATG上游 6 2 2bp片段进行序列分析发现 ,该区域富含GC ,其中有 5个GC盒 (分别命名为GC Ⅰ～GC Ⅴ ) .将上述片段插入到荧光素酶报告载体pGL3 Basic ,分别对 5...
辐射诱导转录子RIGb cDNA对HeLa细胞增殖的抑制作用
辐射诱导基因 基因表达 细胞周期 细胞增殖
2007/12/20
摘要 核酸序列同源性分析和RT -PCR确定辐射诱导转录子RIGb是染色质重构基因CHD6表达的一个剪接转录子 .Northern杂交结果表明 ,0 . 5Gyγ射线诱导RIGbmRNA表达增加 ,但 4Gy大剂量照射对其表达无明显的影响 .正常成人组织Northern杂交结果显示 ,RIGb基因在心脏、肝脏和睾丸中有高表达 .细胞生长曲线分析结果表明 ,转染和稳定表达RIGb的人宫颈癌细胞 (H...
摘要 利用RNA干扰技术构建DNA-PKcs表达抑制细胞模型,探讨DNA-PKcs对HeLa细胞信号转导相关基因表达的调控作用.通过观察细胞对辐射及顺铂的敏感性,鉴定细胞表型变化.用寡核苷酸芯片检测细胞信号转导相关基因的转录谱,并用RT-PCR方法和SEAP检测系统进一步验证基因的表达变化.所筛选出的DNA-PKcs表达抑制细胞对辐射及顺铂的敏感性升高,15个与细胞信号转导相关的基因表达升高,其中...
摘要 本文从染色质及转录活性染色质的模板效率探讨辐射对核转录活性影响的机制。实验结果表明:(1)肝脾染色质模板功能的变化分别平行与肝脾细胞核转录活性的变化提示,辐射至少部份是通过改变染色质的模板功能而影响细胞核的转录活性;(2)体外照射下,活性染色质模板活性较非活性染色质改变明显,提示射线可能主要是通过影响活性染色质区域的模板功能而改变核合成RNA的能力。
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