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正常状态和搞病毒状态的HeLa细胞翻译小鼠干扰素mRNA能力的比较
细胞翻译小鼠 病毒状态
2008/2/5
摘要从NDV病毒诱导的Lpa细胞中分离的小鼠干扰素mRNA能在完整的HeLa细胞中翻译，而且翻译时小鼠干扰素在HeLa细胞中的生产有较好的重复性，平均产量为72单位/毫升。然而在用人的干扰素处理HeLa细胞后，处在抗病毒状态的HeLa细胞就不能再翻译小鼠的干扰素mRNA。这一现象可能与干扰素的抗病毒机制有关。
摘要为了合成3p端无pol式A）的病毒RNA（登革热病毒II）的3’区的长的cDNA，我们用RNA连接酶，把30端被PCP封闭了的Poly(A) <50bP连在病毒RNA的3'端，构成一个病毒RNA-posy( A升PC P型模板，可用oligo(dT,。一：：）作引物，再用Watson和Jackson (1985)的RNase H代替硷降解法来合成CDNA。结果获得了）5kb的cDNA。重组克隆...
摘要以本实验室构建的能够装载外源RNA片段的MS2噬菌体“病毒样”颗粒表达载体为基础，利用定点突变技术将衣壳蛋白基因的第15位密码子由编码苏氨酸突变为胱氨酸。表达产物在35%蔗糖密度梯度处有一目的产物，目的产物在透射电镜下呈球形，直径大小约为27 nm。用马来酰亚胺-5′-荧光素对表达产物进行化学修饰，经光谱分析、SDS-PAGE分析和MALDI-TOF MS鉴定，证明巯基在表达产物的外表面，并能...
RNA介导的病毒抗性在转基因烟草中的遗传分析
RNA介导的病毒抗性的遗传 马铃薯Y病毒 转基因烟草 转基因整合方式
2008/1/29
摘要以含非翻译马铃薯Y病毒外壳蛋白（PVY-MCP）基因的抗病和感病T0代转基因烟草为材料，对转基因及RNA介导的病毒抗性在T1-T4代转基因植株中的遗传进行了研究。结果表明，在含低拷贝（1-2个）转基因的感病植株后代中，转基因是作为一个单显性遗传位点，遵循孟德尔遗传分离规律，各世代转基因植株仍表现感病。含多拷贝（4-6个）转基因的抗病植株，转基因在T1代的分离虽符合多位点插入的15：1和63：1...
乙型肝炎病毒DNA克隆的菌落原位杂交
2008/1/15
在遗传工程的DNA 重组试验中，需从大量的转化子中筛选含特殊DNA 序列的克隆，尤其是当被克隆的基因中无选择标记时，应用菌落原位杂交进行筛选是最理想的。其主要优点是特异性强，因此它成为DNA体外重组实验的重要方法之一。为了便于使Grunstein 等〔习的菌落原位杂交法在我国推广应用，我们对Grunstein等的方法作了适当修改，并对影响实验结果的几个主要因素作了初步比较。采用本修改方法筛选含乙型...
应用RNAi技术培育抗TMV病毒转基因烟草
RNAi 转基因烟草 TMV
2008/1/12
摘要利用烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白基因构建RNAi干涉载体, 通过叶盘法转化至烟草K326 和龙江911两个栽培品种。对转基因株系的荧光定量PCR分析表明, 不同转基因株系的病毒RNA靶序列都得到一定程度的降解, 抗病性鉴定结果证实, 转基因K326和龙江911两个栽培品种的转基因材料分别有83％和90％转基因株系对TMV呈现免疫级抗性。
摘要 h IL- 2基因和 m IFN- γ基因经 IRES连接后克隆入腺相关病毒质粒表达载体 p AC中 ,构建得双基因质粒表达载体 p AC- FRI.体外经阳离子脂质体 Dosper介导转染小鼠肝癌细胞 MM45T.Li,Northern印迹及生物活性检测分别从 RNA水平和蛋白质水平证明了 2个基因的表达 .直接瘤内注射 Dosper- DNA复合物后 ,与对照组 ( Lac Z)相比 ,...
腺病毒5型E1A基因对永生化人支气管上皮细胞生长的抑制作用及其机理
E1A基因 永生化人支气管上皮细胞 肺癌 癌前病变 基因预防
2007/12/24
摘要 腺病毒 5型早期区 1 A( Ad5E1 A)基因是新近发现的一个肿瘤抑制基因 .其产物 E1 A蛋白是多功能转录因子 ,它能从正、负 2个途径调控多种细胞基因的转录 ,具有降低体内致瘤性及抗转移等活性 .为了探讨 E1 A基因对代表肺癌癌前病变的永生化人支气管上皮细胞的生长是否具有抑制作用 ,构建了在真核细胞高表达 E1 A基因的重组质粒 p CEP4- E1 A.通过脂质体介导将 E1 ...
人巨细胞病毒IE基因调节子特异DNA结合蛋白cDNA的克隆和鉴定
HCMV-IE基因 DNA结合蛋白 cDNA表达库
2007/12/24
摘要 本文利用人巨细胞病毒(HCMV)IE基因调节子中特异DNA片段作为探针,自人Hela细胞cDNA表达库中筛选并分离出两个编码能与该探针结合的DNA结合蛋白cDNA克隆(DJ-1和EH-2)。其中EH-2编码的蛋白具有明显的DNA结合序列特异性。比较DJ-1和EH-2克隆在HCMV戚染不容性和可容性畸胎瘤细胞中mRNA表达水平,未见明显差异。DJ-1和EH-2克隆可能涉及IE基因表达调控过程。...
广西HBsAg阳性母亲的胎儿肝、肾细胞中乙肝病毒DNA存在状态的研究
ＨＢV ＤＮＡ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法
2007/12/21
摘要 采用核酸分子杂交Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法，以３２Ｐ标记的ＨＢＶＤＮＡ为探针，检测ＨＢｓＡｇ阳性母亲引产的４０例胎儿的肝、肾组织。结果有２例胎肝和１例胎肾细胞ＤＮＡ出现大于３．２ｋｂ的杂交带，表明ＨＢＶＤＮＡ已处于整合状态。胎肾细胞基因组中查出ＨＢＶＤＮＡ整合为首次报道。
摘要 为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β...
摘要 观察含我国登革 2型病毒株 (D2 4 3)的PrM E基因的复制型SFV(semlikiforestvirus)重组质粒DNA的免疫原性 ,为登革新型疫苗的研制提供依据 .将PrM E基因自T载体上切下 ,插入复制型SFV病毒载体质粒DNA中 .将此重组质粒DNA以电穿孔法导入BHK2 1细胞 ,用间接免疫荧光法在感染细胞内可检测到登革 2型病毒特异蛋白的表达 .采用去除内毒素的质粒提...
腺相关病毒与人多药耐药基因重组载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达
腺相关病毒 MDR1 载体构建 基因表达
2007/12/18
摘要 腺相关病毒 (adeno- associated virus,AAV)属细小病毒科 ,是一种最小的动物病毒 .具有其他病毒载体所没有的优点 ,在基因治疗中日益受到瞩目 .以 AAV的一种多克隆载体为基础 ,构建了携带 MDR1基因的重组腺相关病毒载体 (r AAV- MDR1 ) ,经 2 93细胞包装成重组病毒 .将重组质粒、重组病毒分别转染和感染 NIH3T3细胞 ,用 PCR和 MTT...
中国医学专家昨晚完成冠状病毒全基因组序列测定
2007/11/1
中新网4月16日电 据新华网报道，军事医学科学院微生物流行病研究所与中国科学院北京基因组研究所通力合作，于4月15日晚11时成功地完成了对冠状病毒的全基因组序列测定。 据了解，3月21日，军事医学科学院微生物流行病研究所专家从非典型性肺炎组织标本中成功地分离出了冠状病毒，并建立了动物模型。在此基础上，专家们通过对来自不同地区的非典型性肺炎患者的肝、肺、咽拭子和淋巴结标本中冠状病毒的全基因组序列测定...