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中国科学院微生物所林啸研究团队合作建立高通量植物抗病基因克隆平台
林啸 植物抗病 基因克隆
2023/11/20
2023年8月30日，中国科学院微生物研究所林啸研究团队、英国塞恩斯伯里实验室（The Sainsbury Laboratory）Jonathan D.G. Jones团队、中国农科院农业基因组研究所黄三文团队和韩国首尔大学Kee Hoon Sohn团队合作，在Nature Genetics杂志发表题为“Solanum americanum genome-assisted discovery of...
雄性不育基因克隆： 解决杂交小麦规模制种难题
小麦规模制种难题；雄性不育；雄性不育突变体
2022/4/12
杂种优势利用是今后大幅度提高小麦生产水平的重要途径，亦是世界百年科学难题，在2016年第七届世界作物科学大会上被国际同行称为作物科学领域的“最后的前沿”。
目的 分别克隆灰毡毛忍冬野生型与湘蕾型ACS3基因，并进行生物信息学和表达模式分析。方法 筛选灰毡毛忍冬转录组数据库中与ACS蛋白同源性较高的Unigene序列，设计引物，利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及RACE技术对该Unigene进行全长克隆；用生物信息学软件分析蛋白的理化性质、结构域和同源性等特性；借助qRT-PCR检测1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶（ACS3）基因在不同品种、不同花...
目的 克隆刺五加香叶基焦磷酸合成酶（geranyl pyrophosphate synthase，GPS）基因的cDNA序列并分析基因序列特征、不同器官中基因表达水平及其与皂苷含量的相关性。方法 提取刺五加的RNA，逆转录为cDNA。根据转录组测序结果中编码GPS的unigene（c37362.graph_c0），设计特异性引物，经过PCR扩增GPS基因的cDNA全长。利用实时荧光定量PCR（qR...
目的 克隆霍山石斛β-1，4-木糖基转移酶（IRX9）基因，并进行生物信息学、密码子偏性分析。方法 根据霍山石斛转录组数据获得的IRX9基因序列设计特异性引物，通过RT-PCR技术得到IRX9基因cDNA的全长序列，并进行生物信息学分析。结果 霍山石斛IRX9基因全长1 553 bp，包含一个长度为1 047 bp的开放阅读框，编码348个氨基酸，理论相对分子质量为39 350，等电点为7.26，...
旨在获得藏鸡KLF15基因序列，阐明其组织和时序表达谱，并分析该基因表达与肌内脂肪（IMF）含量的关系。本研究选取1、81、119、154、210日龄健康公母藏鸡各5只为试验动物，利用RT-PCR技术克隆KLF15基因，利用生物信息学软件分析基因生物学特征，利用实时荧光定量PCR（fluorescence quantitative PCR，qPCR）检测KLF15基因在藏鸡不同组织、不同发育阶段的...
牦牛KDM1A基因克隆及其在不同发育时期睾丸中的表达规律
牦牛 KDM1A 表达 睾丸
2019/3/9
本研究旨在克隆牦牛组蛋白去甲基化酶1A（lysine-specific histone demethylase 1A，KDM1A）基因，检测其在牦牛不同组织及睾丸发育过程中的表达水平。采集4~5岁健康牦牛心、脾、肝、卵巢、肺、大脑、肾、子宫、大肠、睾丸和胃，提取各组织样的总RNA，另采集不同发育时期睾丸组织：胎牛（5~6月）、幼年时期（1~2岁）、性成熟时期（4~5岁），老年时期（9~10岁）。利...
研究钙离子传感器CIPK (calcineurin B-like protein-interacting protein kinase)基因在芍药(Paeonia lactiflora)不同组织及在正反向钙处理后花茎中的表达变化, 为通过采前喷施钙溶液调控芍药花茎挺直度提供理论依据。本文实验以芍药‘红艳争辉’花茎RNA为模板, 采用PCR技术对芍药CIPK基因进行克隆, 并通过定量实时PCR技术对...
小黑杨PnGRAS47基因克隆及氮素诱导下的表达模式分析
小黑杨 PnGRAS47基因 生物信息学分析 氮素诱导 表达模式
2018/11/28
GRAS转录因子是一种植物特有且广泛分布的转录因子, 参与调控植物生长发育及在植物响应环境胁迫中发挥重要的功能。本研究通过克隆小黑杨(Populus simonii ×P. nigra) PnGRAS47基因序列, 分析其基因及蛋白序列的基本特征; 通过实时定量PCR技术检测在不同形态和不同浓度的氮素处理下小黑杨PnGRAS47基因的组织表达模式。研究结果显示: PnGRAS47基因全长1 528...
巨型住肉孢子虫烯醇酶基因克隆与表达
住肉孢子虫 烯醇酶 重组蛋白 交叉反应
2019/5/14
巨型住肉孢子虫（Sarcocystis gigantea）是羊体内一种常见寄生虫，多寄生于羊横纹肌内形成包囊，导致羊肉大量废弃，给畜牧业带来巨大经济损失。本研究尝试筛选能有效诊断住肉孢子虫感染的抗原。通过免疫印迹及质谱分析筛选到巨型住肉孢子虫候选诊断抗原烯醇酶，利用染色体步移技术扩增两侧翼未知序列并表达重组蛋白。应用生物信息学分析和免疫印迹对该蛋白诊断价值进行评价。结果筛选到的候选蛋白为巨型住肉孢...
为进一步探究KK-42缩短蜕皮周期的分子机制，本研究以日本沼虾幼虾为材料，通过RACE技术克隆了几丁质降解途径中的限速酶基因NAGase cDNA全长序列，定量测定了KK-42处理不同时间对头胸甲表皮组织中NAGase mRNA相对表达量和对应酶活力的影响。序列分析结果显示，NAGase cDNA全长2 536 bp，编码617个氨基酸。同源性分析显示，NAGase基因保守性较低，与凡纳滨对虾的相...
香鱼白细胞介素17C基因克隆及鳗利斯顿氏菌侵染后的时空表达
香鱼 白细胞介素17C基因 基因克隆 鳗利斯顿氏菌 时空表达
2019/1/22
为了解香鱼白细胞介素17(interleukin 17, IL-17)的序列特征、系统发育及其与鳗利斯顿氏菌侵染的相关性，实验采用RACE-PCR方法扩增出香鱼IL-17C基因cDNA序列，并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了鳗利斯顿氏菌侵染后香鱼各组织中IL-17C基因的表达变化。结果显示，香鱼IL-17C基因cDNA序列全长1 087 bp，含534 bp的开放阅读框，在3'端...
【目的】克隆一种梨小食心虫Grapholita molesta触角中谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase, GST）基因并分析其结构特征，明确其表达特点及该基因编码蛋白的酶学特征，以期为该基因的功能研究提供理论依据。【方法】根据梨小食心虫雌虫触角转录组数据，利用RT-PCR克隆梨小食心虫GST基因；通过实时荧光定量PCR测定该基因在成虫触角、头（去触角）、胸、腹、...
【目的】克隆草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的组织蛋白酶L（cathepsin L, CatL）基因，分析该基因的序列特征并制备该酶多克隆抗体，为探析其生理功能奠定基础。【方法】根据甜菜夜蛾Spodoptera exigua的组织蛋白酶L基因开放阅读框(ORF)序列两端直接设计引物克隆草地贪夜蛾组织蛋白酶L基因。利用生物信息学软件分析该基因的序列特征，利用ClustalX2软件...
呼吸爆发过程可以产生大量的活性氧，核因子E2相关因子2（Nrf2）在此过程中起着重要作用。实验克隆和分析了草鱼的Nrf2基因，随后制备了Nrf2蛋白的多克隆抗体，研究了其和呼吸爆发的关系。草鱼Nrf2基因cDNA长度为1994 bp，开放阅读框为1782 bp，编码593个氨基酸（aa）。氨基酸序列比对发现，草鱼Nrf2基因与鲤的同源性最高，为87%；草鱼Nrf2基因含有6个进化过程中保守的Neh...