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人酸性成纤维细胞生长因子基因在大肠杆菌中的克隆和表达
αFGF 基因重组和表达
2007/12/24
摘要 用Ncol Ⅰ和EcoRI双酶酶切,获得人酸性成纤维细胞生长因子haFGF基因,将该基因片断连接进入pBV220的EcoRI位点。连接物转化入大肠杆菌RR1,用菌落原位杂交的方法筛选出杂交阳性菌株,用酶切和Southern Blot的方法确定haFGF的插入与否以及插入方向的正反,结果我们得到了haFGF正向插入在pBV220 PLPR启动子下游的重组质粒pBV-αFGF。42℃热诱导使重组...
人成纤维细胞转录因子Sp1Sp3对p16~(INK4a)基因的调控
人成纤维细胞转录因子Sp1Sp3 人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS) 电泳迁移率变动分析(EMSA) 细胞周期蛋白依赖激酶(cdk)
2007/12/24
摘要 p16 INK4a是一种细胞周期蛋白依赖激酶 (cdk)的抑制因子 ,它通过抑制cdk4与cdk6的活性 ,使视网膜母细胞瘤抑制蛋白Rb处于低磷酸化状态 ,从而使细胞阻滞于G1期 .对p16 INK4aATG上游 6 2 2bp片段进行序列分析发现 ,该区域富含GC ,其中有 5个GC盒 (分别命名为GC Ⅰ~GC Ⅴ ) .将上述片段插入到荧光素酶报告载体pGL3 Basic ,分别对 5...
热量限制延缓人二倍体成纤维细胞衰老的体外模型
热量限制 细胞复制衰老 人二倍体成纤维细胞IMR-90
2007/12/24
摘要 为建立人二倍体成纤维细胞IMR 90的热量限制体外模型 ,分别采用低浓度、正常浓度和高浓度葡萄糖培养条件 ,常规传代培养IMR 90细胞 ,利用综合细胞衰老指标对模型进行评价 .低、正常和高浓度葡萄糖培养条件组IMR 90细胞平均寿限分别为 5 8 3、5 5 0和 4 7 2PDL(群体倍增水平 ) .低浓度葡萄糖培养IMR 90细胞早期增长速度有所减慢 ,但仍保持对生长因子诱导的细胞增...
逆转录病毒载体构建的hNT-3基因在大鼠成纤维细胞中的表达
逆转录病毒载体 人神经营养因子-3 基因治疗
2007/12/24
摘要 为了检验重组逆转录病毒对体外培养细胞的感染能力和效率 ,用逆转录病毒载体构建的人神经营养因子 3(pLXSN NT3)感染大鼠原代成纤维细胞 ,经G4 18筛选获得了稳定整合有外源hNT 3的工程细胞株 .RT PCR证实了外源基因hNT 3已整合到宿主细胞基因组 ,并可合成其mRNA ;PCR检测方法证明细胞株不含具有感染能力的病毒 ;Western印迹证明了细胞能正确表达hNT 3;大...
恶性转化的成纤维细胞表皮生长因子受体的研究
表皮生长因子 表皮生长因子受体 转化
2007/12/21
摘要 本文用受体的放射性配基结合分析方法观察了C_3H小鼠胚胎成纤维细胞C_3H_(10)T1/2 CL8(简称NC_3H_(10))和~3H-TdR恶性转化的C_3H_(10)T1/2CL8(简称TC_3H_(10))的表皮生长因子受体(EGFR)。结果表明细胞恶性转化前后的EGFR都存在高亲和力和低亲和力两种结合位点,细胞恶性转化后能结合表皮生长因子的EGFR结合位点减少,Western bl...
摘要 我们用表皮生长因子对用氚标记的脱氧胸苷转化的C_3H_(10)T1/2 CL8细胞进行刺激,研究了表皮生长因子对该细胞胞浆及胞核内DNA拓扑异构酶活性的影响,结果发现,表皮生长因子可以使转化的小鼠成纤维细胞胞浆和胞核内的DNA拓扑异构酶活性增加。
表皮生长因子对鼠胚成纤维细胞细胞周期的调节作用
表皮生长因子 P34~(cdc2)激酶 细胞周期
2007/12/20
摘要 本文观察了表皮生长因子(EGF)对小鼠胚胎成纤维细胞C_3H/10T_1/2CL_8(简称C_3H/10)细胞周期的影响。结果表明:EGF使S期提前,细胞周期缩短。进一步探讨了EGF对细胞周期影响的机制,发现EGF可活化在细胞周期调节中起重要作用的P34~(cdc2)激酶(简称CD2K),使CD2K在周期中活性高峰出现的时间提前,提示EGF对细胞周期的影响可能通过作用于CD2K实现的。
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TK/GCV系统体外诱导成纤维细胞凋亡
胸苷激酶基因 增生性瘢痕 成纤维细胞 细胞凋亡
2007/12/20
摘要 在体外培养并鉴定增生性瘢痕成纤维细胞( F B)的基础上,采用重组逆转录病毒 G T K 介导并联合应用 ganciclovir 对 F B细胞进行体外杀伤,以探究 T K/ G C V 系统体外杀伤成纤维细胞的机制.经光镜、电镜及凝胶电泳等实验发现,在 T K/ G C V 对瘢痕成纤维细胞的杀伤过程中存在明显的细胞凋亡现象.这提示 T K/ G C V 系统对体外培养的瘢痕成纤维...
Lisinopril和Losartan对乳鼠心脏成纤维细胞AT1受体基因表达水平和ACE活力的影响
Lisinopril Losartan 成纤维细胞 AT1受体基因表达 血管紧张素转换酶
2007/12/19
摘要 为了解两种降压药物 -血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme,ACE)抑制剂(lisinopril)和血管紧张素 型受体 (AT1 R)拮抗剂 (losartan)在心脏间质组织中的作用 ,进行了药物对乳鼠心脏成纤维细胞 AT1 R基因表达和血管紧张素转换酶活力影响的实验 .用 RT- PCR方法检测体外培养乳鼠心脏成纤维细胞 AT1 R基因的表达...
P16降低二倍体成纤维细胞的凋亡敏感性
p16 细胞凋亡 成纤维细胞(2BS)
2007/12/19
摘要 脂质体介导法分别介导正、反义p16逆转录病毒表达载体转染人胚肺二倍体成纤维细胞 ,经鉴定后 ,分别用Hoechst33342 PI双染、TUNEL、DNAladder分析检测各转染细胞对H2 O2 的敏感性 .结果显示 ,反义p16重组体转染细胞较易凋亡 ,而正义p16重组体转染细胞不易凋亡 .Western印迹检测显示 ,正义p16重组体转染细胞中P2 1表达增强 ,caspase 3的...
摘要 p2 1 WAF-1又称 sdi- 1 ,是细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 ( CDK)的抑制物基因 ,与细胞增殖调控及细胞衰老密切相关 .本研究为了解正常细胞中 p2 1 WAF-1对生长因子的反应性 ,以及其在细胞衰老时的表现 .我们以不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞 ( 2 BS细胞株 )为实验对象 ,通过 Northern杂交术 ,观察表皮生长因子 ( EGF)对年轻 (低代龄 )细胞与...
人衰老成纤维细胞经紫外线损伤后的DNA修复和细胞周期调控
衰老细胞 DNA损伤修复 细胞周期 检验点控制
2007/12/18
摘要 以体外培养的不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞(2 B S)为对象,紫外线诱导 D N A 损伤后,观察细胞形态、增殖特性、细胞周期、 D N A 修复变化等细胞应答以及 gadd153、p21 W A F1/ C I P1/ S D I1、p53 等基因的转录水平的表达变化.结果显示:紫外线诱导 D N A 损伤后,衰老(> 55 代)2 B S细胞形态及增殖能力的改变不如年轻细胞(< ...
摘要 为探讨二氧化硅在大鼠肺内引发的一系列纤维增生反应,试图寻找一种关键的细胞增生因子,采用高压液相色谱技术,包括凝胶过滤柱层析、离子交换柱层析以及反相C4高压液相色谱柱层析,获得一种新的巨噬细胞源成纤维细胞生长因子(alveolarmacrophage-derivedfibroblastgrowthfac-tor,AMDGF),SDS-PAGE结果表明它已达到均一的纯度,其分子量为58000,p...
小鼠成纤维细胞凋亡过程中P53与bcl-2表达的时序性
细胞凋亡 P53 bcl-2 基因表达
2007/12/18
摘要 为探讨细胞凋亡过程中,bcl-2与P53,这两种凋亡关键性基因的相互关系,用5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导小鼠正常与恶性转化的成纤维细胞的凋亡,观察了这两种基因在凋亡过程中表达变化的时序.经流式细胞计检测,这两种细胞在5-Fu作用24h均出现了凋亡峰,细胞存活率随之下降,DNA电泳显现梯状断裂.Northern杂交结果显示,在5-Fu作用6h后两种细胞P53mRNA水平已明显增高,而bcl-2...