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摘要诺加拉霉素能有效封锁盘其网柄菌转录，放线菌酮和嘌呤霉素对抑制该菌蛋白合成有相近效 力。盘基网柄菌分化发育后期积累的mRNAs，在细胞被分散（分化逆转）时，专一地被快速 降解。诺加拉霉素、放线菌素D和柔红霉素合用稳定某些快速降解的mRNA。放线菌酮稳定所 有mRNAs.嘌呤霉素不能稳定后期mRNAs，且有促进降解作用。表明后期mRNAs的快速降解不需 要新蛋白合成，分化逆转只增加了已有酶的作用。...
野生大豆未成熟种子总mRNA的分离及其cDNA的分子克隆
野生大豆 mRNA cDNA 克隆
2008/2/2
摘要用氯化锂沉淀法从野生大豆(G.sojα)未成熟种子中制备总RNA，经oligo(dT)-纤维素柱亲和 层析，获得总mRNA，在兔网织红细胞体系中表现出一定翻译活性。以总mRNA为模板，oligo( dT)12 18 为引物，反转录酶催化合成第一链cDNA，RNaseH-DNA聚合酶Ι协同合成第二链cDN A。双链cDNA的长度大约为200-5000bp，且不存在发夹结构。将双链cDNA修补后钝...
摘要卵泡抑素是与抑制素/活化素功能密切相关的一种糖蛋白激素,采用定量竞争RT-PCR技术对鸭各级卵泡及成熟与未成熟精巢中的卵泡抑素和抑制素/活化素βB亚基的mRNA表达丰度进行了研究,发现在上述组织中均有此两基因mRNA的表达,且只在小卵泡中表达较丰富。卵泡抑素在小黄卵泡(SYF)中表达量最高,以其mRNA的平均相对丰度为1.00,则F1(最大卵泡)、F2、F3、F4、F5、F6～8,LWF(大白...
牛泌乳素mRNA的分离及鉴定
牛泌乳素 mRNA 寡聚核苷酸探针 Northern 印迹杂交 体外翻译
2008/2/1
摘要本文报道了从牛脑垂体提取总RNA，经寡聚脱氧胸苷纤维素亲合层析分离获得牛脑垂体Poly( A)+RNA。牛泌乳素mRNA经含羟甲基汞琼脂糖凝胶电泳分析，估计其长度约为1200个核苷酸。 根据牛泌乳素的部分氨基酸序列推断并合成寡聚核苷酸探针，经Northern印迹杂交及放射自 显影分析，证实了该mRNA中含有牛泌乳素mRNA的序列。在兔网织红细胞体外翻译体系中，牛 泌乳素mRNA促进了35S-甲...
摘要X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良（spondyloepiphyseal dysplasia tarda, SEDL）是一种少见的由SEDL基因突变引起的骨软骨发育障碍性疾病，病变主要累及腰椎和近端承重大关节。为研究SEDL基因剪接受体突变(IVS2 -2A→C)对mRNA加工的影响，从该突变所致SEDL患者，以及健康对照者外周血中提取总RNA，逆转录合成cDNA, 以此为模板进行聚合酶链式反应（...
小鼠SmX5基因mRNA的选择性剪接
自免疫睾丸炎 差异剪接 内含子保留 snRNP相关蛋白
2008/1/24
摘要通过RT-PCR技术，发现小鼠SmX5基因的另外3种选择性剪接体，分别命名为SmX5a、b和c。小鼠SmX5a cDNA具有完整的内含子1，而SmX5b cDNA含有部分内含子2。SmX5c的保留片断和SmX5b在相同位置起始，但保留部分延伸经过余下的内含子2。余下的DNA序列在所有内含子-外显子边界处都符合剪接的“GTAG”规则。RT-PCR的表达分析显示这3种异构体都是稳定的转录产物，均...
mRNA选择性剪接的分子机制
mRNA 选择性剪接
2008/1/21
摘要真核细胞mRNA前体经过剪接成为成熟的mRNA，而mRNA前体的选择性剪接极大地增加了蛋白质的多样性和基因表达的复杂程度，剪接位点的识别可以以跨越内含子的机制（内含子限定）或跨越外显子的机制（外显子限定）进行。选择性剪接有多种剪接形式：选择不同的剪接位点，选择不同的剪接末端，外显子的不同组合及内含子的剪接与否等。选择性剪接过程受到许多顺式元件和反式因子的调控，并与基本剪接过程紧密联系，剪接体中...
摘要HCMV UL97基因编码一种蛋白激酶，该酶参与调控病毒DNA的复制和衣壳的形成，且序列异常保守，可作为抗HCMV治疗的重要靶位。基于HCMV UL97 mRNA T3位点附近的序列，设计一段与该位点互补的引导序列（Guide Sequence，GS），并将其与大肠杆菌核酶P催化亚基（M1 RNA）的3’末端共价连接，构建了一种序列特异性的M1GS（M1-T3）。体外试验证实，所构建的M1-T...
摘要 以含有部分Bcl-X序列的微小基因为研究模型，研究了TPA对Bcl-X前体mRNA选择性剪接的在体内和体外调控作用。通过RT-PCR和定点突变实验检测，结果表明PKC信号系统能调控Bcl-X前体mRNA选择性剪接，其机制可能是通过应答序列来调控Bcl-X前体mRNA 5ˊ上游和下游剪接位点的选择利用。
摘要采用相对定量反转录多聚酶链式反应（RT-PCR）的方法，以β-actin为内标，测定绍鸭排卵前卵泡F1、F3、F5及大白卵泡（LWF）颗粒层与膜层中GH受体（GHR）、IGF-I型受体（IGF-IR）和 FSH受体（FSHR）、LH受体（LHR）mRNA表达水平，以分析生长轴和生殖轴激素对绍鸭卵泡发育的协同调节作用。结果表明：在所测定的各级卵泡中，GHR mRNA在膜层的表达水平均显著高于颗粒...
摘要 采用高效的由mRNA合成cDNA的方法,我们得到了含有3.7kb的脂肪酸合成酶基因片段的克隆pFAS_(203)。它具有限制内切酶PstⅠ、BamH Ⅰ、HineⅡ、PvuⅡ、Ava Ⅰ以及Pvu Ⅰ酶切位点,与已经得到的经杂交选择的mRNA离体翻译产物鉴定的cDNA克隆pFAS_(15)有部分重叠。对饥饿的糖尿病大鼠注射胰岛素并饲以无脂食物,肝中FAS mRNA以及其前体RNA含量增加,当...
鉴定9个新的RHD基因mRNA可变剪接体
RHD基因 可变剪接/选择性剪接 Rh血型
2007/12/29
摘要 为了研究各种RHD基因mRNA可变剪接体的基因结构, 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常人脐血样本RHD mRNA, 对RHD cDNA进行TA克隆和序列分析, 对各可变剪接体的剪接位点进行DNA序列分析, 并将RHD mRNA进行表达序列标签(ESTs)分析。结果在28个阳性克隆中, 除全长RHD cDNA外, 共检测到12种(包括9种新的)RHD可变剪接体, 发现外显子遗漏、...
热休克T细胞中mRNA的表达
热休克蛋白 mRNA 基因表达
2007/12/24
摘要 富集的人外周血T淋巴细胞经40—42℃保温(热休克)可诱导产生90kd和71kd的两种主要热休克蛋白(HSP),此外,62和34kd HSP也可在不同条件下诱导。从不同处理的T淋巴细胞中提取mRNA并在免网织细胞裂解液系统中进行体外转译,显示出相同的主要HSP。其中71和62kdHSP不仅在升温时还可在低温(4℃)下诱导,表明淋巴细胞中几种主要HSP的诱导机制不完全相同。比较L-~(35)S...
在BCR/ABL基因组上敲入mRNA不稳定元件可逆转K562细胞恶性转化
慢性粒细胞白血病 费城染色体 RNA降解 基因打靶
2007/12/19
摘要 融合基因 BCR/ABL在慢性粒细胞白血病的恶性转化过程中起着主导作用 .针对融合基因的 3′端构建了一个定点基因打靶质粒 ,p F2 .neo.abl(1 - 4) ,将一段可引发核内 RNA降解的元件 ,URE,定点整合到融合基因 poly(A)位点的上游 .打靶质粒经脂质体转染 K562细胞后 ,在 96孔板上进行 40 0 μg/ml G41 8筛选 ,neor克隆进一步在 2 4孔...