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单核苷酸多态性检测方法的研究进展
单核苷酸多态性 检测技术 检测平台
2007/12/20
摘要单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）的研究已成为人类后基因组时代的主要内容之一。因此建立高度自动化和高通量的SNP检测分析技术十分重要。文章系统地介绍了最新发展的几种SNP检测技术的原理和检测平台，详细阐述了等位基因特异性杂交、内切酶酶切技术、引物延伸法、寡核苷酸连接反应等SNP检测原理，以及平板读数仪、基因芯片、微球阵列技术和质谱仪等检测平...
摘要 大黄蒽醌衍生物是中药大黄的主要成份。该类衍生物与钙调素(calmo-dulin,CaM)依赖的磷酸二酯酶(PDE)的相互作用表明:它们可作用子钙调素。其中,大黄酸结合CaM并抑制CaM依赖的磷酸二酯酶(CaM-PDE);而大黄素、大黄酚和芦荟大黄素既刺激CaM-PDE的活力,又刺激PDE的基础活力,其作用机制尚待阐明;当有Ca~(2+)或无Ca~(2+)条件下测定时,大黄酸对PDE基础活力均...
摘要 本文用凝胶直读法、末端鉴定法等相配合,测定了樗蚕(Philosamia cynthia)絲腺5SrRNA的核苷酸顺序:AGACAACGUCCAUACCACGUUGAAAACACCGGUUCUCGUCCGAUCACCGAAGUCAAGCAACGUCGGGCGCGGUCAGUACUUGGAUGGGUGACCGCCUGGGAACACCGCGUGCUGUUGGCUU比较了樗蚕、蓖麻蚕、柞蚕、家蚕、果...
摘要 将臭鼩DAN经过Bam H Ⅰ酶切得到的高重复顺序DNA最小片段重组到质粒pAT153上,转化后得到了含有臭鼩BMS(Bam H Ⅰ)-1高重复顺序DNA片段的克隆。再把此片段重组到M_(13)mp19噬菌体DNA上。用末端终止法测得全部苷酸顺序为495个碱基对。对臭鼬BMS(Bam H Ⅰ)-1片段的结构特点进行了分析,并和树鼩TSr(BglⅡ)-1高重复顺序DNA进行了比较。为确定树鼩在...
摘要
单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）是第三代遗传标记，在基因定位、遗传疾病和人类起源等理论研究中具有重大意义, 在抗药性或药物过敏反应中扮演着极其重要的角色，正逐步成为分子诊断、临床检验、新药研发的重要手段。随着人类基因组测序的完成，SNP分型和发现成为遗传和生命医学领域研究的热点之一。近年来，SNP的检测方法层出不穷，发展很快。文章综述和...
刺猬高重复顺序DNA的分子克隆及核苷酸顺序分析
刺猬 高重复顺序 分子克隆 DNA顺序
2007/12/20
摘要 为了分析比较食虫目高重复顺序的结构特征,我们将食虫目动物刺猬的高重复顺序DNA进行了分离、纯化、分子克隆,并测出了1186bp的核苷酸顺序。经分析发现在碱基组成上它与食虫目另一动物臭鼩有许多相似之处,如:G-C碱基对与A-T碱基对在整个片段中分布很不均衡;片段内部含有许多连续多次重复的短片段等,很可能为食虫目动物所特有。
大鼠高重复顺序DNA的核苷酸顺序分析及其与灵长类类α-DNA顺序的比较
大鼠高重复顺序 类α顺序 分子克隆 序列分析
2007/12/20
摘要 啮齿目动物高重复顺序DNA的结构特征,虽已有人进行过分析,并提出大鼠DNA中有酶切位点分布独特的高重复顺序,也有人认为在Sprague-Dawlay大鼠中有类似于α-DNA大小的高重复顺序,并命名为α型(α-type),是否大鼠中也含有类α顺序,并没有人讨论过。我们对Wistar大鼠高重复顺序DNA进行了分离、纯化、分子克隆及核苷酸序列分析,测定了全序列为370bp,它也是具有酶切点分布独特...
摘要 Survivin是新近克隆的一种凋亡抑制蛋白 (IAP)家族成员 ,在几乎所有肿瘤组织中特异性表达 ,而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达 .采用四唑盐 (MTT)比色实验法比较 2 0条抗人survivin反义寡核苷酸对HeLa细胞增殖的抑制效果 ,并从中筛选效果显著的反义寡核苷酸 ,在体外水平进一步验证其抑制survivin表达的能力 .在用 4 0 0nmol L反义寡核苷酸转染...
摘要 为了研究具有临床应用前景的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 脂质体转运系统，以临床药用大豆磷脂为主要原料制备了ｐ Ｈ 敏脂质体，并测定了脂质体体外转染活性、ｐ Ｈ 敏特性、细胞毒性和对 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 抗流感病毒活性的影响 结果发现，批号为 ９８０５１９０３，９８０５１１０２ 和 ９８０５１２０２ 的脂质体具有较高转染活性，但只有ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ 转染活性的 １／５０～１／１００当质粒／脂...
海南汉族、黎族人群纤维蛋白原基因九个位点核苷酸多态性及单体型的比较研究
2007/12/19
摘要 目的 研究海南汉族、黎族人群体纤维蛋白原基因αTaqI、βBclIG/A 、βHinfIA/C 、β448G/A、βBsmAIG/C、β+1689T/G、β-148C/T、β-249C/T 、β-455G/A九个位点的等位基因频率、连锁不平衡关系及单体型。方法 从末梢血提取316名海南汉族个体和182名海南黎族个体的 DNA标本，用PCR-RFLP法及测序法分析多态性和确定基因型，用EH+程...
RT-PCR法扩增的人溶菌酶cDNA的克隆及其核苷酸顺序分析
胎盘 溶菌酶 逆转录-聚合酶链反应 分子克隆 核苷酸顺序
2007/12/19
摘要 本文以人胎盘全RNA为底物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),制备出了人溶菌酶的cDNA片段。在限制性内切酶Sma Ⅰ存在的连接体系内,将此cDNA克隆入载体pUC12的Sma Ⅰ位点。用重组质粒双链DNA的末端终止法测定了其全部的核苷酸顺序,证明其全长为444bp,编码了18个氨基酸的信号肽和130个氨基酸的成熟蛋白组成的溶菌酶的前体蛋白,并证明已成功地在此cDNA的3′末端导入了两...
GM_1激活环核苷酸磷酸二酯酶的作用
神经节苷脂GM_1 钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶 三氟啦嗪
2007/12/19
摘要 神经节苷脂GM1能激活CaM依赖性环核苷酸磷酸二酯酶，其AC50为1．56μg／ml．这种作用并不一定依赖Ca2＋的存在．在有Ca2＋存在时，GM1对PDE的最大激活活性低于CaM，仅为CaM的80．4％；没有Ca2＋存在时，GM1与CaM对PDE有同样的最大激活活性（100％）．GM1能使CaM对PDE的激活曲线左移，AC50降低，但不改变CaM对PDE的最大激活活性．三氟啦嗪能使GM1激...
摘要 本文首次报告用3’—末端核苷酸转移酶将生物素—11—dUTP标记到人工合成的21寡核苷酸上,该d(NMP)_(21)与HBV DNA长链缺口区附近的序列互补,并含HBV DNA的直接重复序列(Direct Repeat)。本文对其标记条件、检出方法进行观察比较,找出合适的条件,制成的生物素化d(NMP)_(21)探针可与标准的HBVDNA进行杂交,检测敏感度为25pg。用这种探针可以从乙型肝...
中国人SRY基因的分离、克隆和核苷酸序列分析
SRY基因 PCR 分子克隆 序列分析
2007/12/19
摘要 睾丸决定因子基因(Testis-determining factor,TDF)位于Y染色体短臂上,它的表达产物诱导睾丸组织的发生。SRY基因(Sex-determining Region of the Y)位于Y染色体的性别决定区内,许多特征显示SRY就是TDF。我们选用与SRY基因相应的引物,用PCR技术对正常人男女各10例的基因组DNA进行扩增。将特异扩增的男性SRY基因片段重组到质粒P...
摘要 人类基因组变异主要以单核苷酸多态性 (SNPs)为主 .采用多荧光标记的PCR单链构象多态性分析法 (MF PCR SSCP)对磷酰核糖焦磷酸合成酶亚基Ⅱ (PRPS2 )基因启动子区的序列进行了SNP的筛选 ,对筛选到的阳性片段进行序列分析以确定SNP的类型及位置 .在 1 5kb的启动子区发现了 2个SNP (- 10 79t c ,- 1110a g) .研究结果为PRPS2基因SNP...