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基因芯片制作中寡核苷酸共价固定方法研究进展
寡核苷酸 基因芯片 载体
2007/12/22
摘要 寡核苷酸在固体支持物如玻璃、硅片、尼龙或塑料表面的牢固、密集、有规律 的离散固定是基因芯片制作技术的关键步骤。综述了国内外寡核苷酸在固体支持物 表面共价固定的主要方法。
摘要 在酸性条件下,用铂催化剂氢化尿嘧啶核糖核苷酸和核苷分别获得双氢尿嘧啶核糖核苷酸和核苷.以此制备了它们的衍生物,进一步通过磷酸二酯法,合成了酵母丙氨酸转移核糖核酸D环中含有双氢尿嘧啶核糖核苷酸的片段DpApG,ApGpDpC和ApGpDpCpGpG.同时还合成了含有双氢尿嘧嚏核苷的片段ApGpD.其中DpApG还用磷酸三酯法合成过.
摘要 本文叙述的修饰核苷酸-假尿嘧啶核苷酸的合成以及它的胸腺嘧啶核昔酸的保护,酵母丙氨酸转移核糖核酸TΨC臂中CpCpGpG和TpΨpCpG的合成.CpCpGpG和TpΨpCpG均已圆满地用于t-RNA~Y^Ala的3'-半分子合成和整分子的全合成.
两个人组蛋白H1基因的亚克隆和它们启动子核苷酸顺序的比较
组蛋白基因 基因克隆 启动子核苷酸顺序
2007/12/21
摘要 从人基因库中分离得到的两个含有不同变种组蛋白H_1基因的λ克隆(λHh8和λHh9),分别把它们含有该基因的片段(8c和9a)插入载体puc8质粒中,得到了亚克隆pHh8c和pHh9a。对这两个人组蛋白H_1基因的启动子(Promoter)和部份编码蛋白质的区域作了核苷酸顺序的分析和比较,确定了它们的启动要素和同系顺序。
摘要 以秦川牛和荷斯坦奶牛的双胎母牛和单胎母牛为实验材料 ,以牛的FSHR基因的第 10个外显子作为标记牛双胎性状的候选基因 ,用SNP法进行了多态检测 .结果发现 ,在秦川牛的双胎母牛中突变率 6 0 % (6 10 ) ,而在单胎母牛中突变率为 2 0 % (2 10 ) ;在荷斯坦奶牛中 ,双胎母牛突变率为31 2 5 % (5 16 ) ,单胎母牛突变率为 6 6 7% (1 15...
经典型霍乱弧菌毒素基因的核苷酸序列分析及其与ELTOR型的比较
霍乱弧菌 毒素基因 序列比较
2007/12/21
摘要 本文首次报导了经典型霍乱弧菌569B株毒素基因的全部核苷酸序列,并与其他经典型和ELTOR型毒素基因的核苷酸序列以及由此推导的氨基酸序列进行比较。发现此两型毒素基因的A亚基核苷酸序列完全相同,而B亚基有2至3个碱基的差别,从而导致相应氨基酸的改变,它们分别位于第18、47和54位氨基酸残基。
蜜蜂5SrRNA核苷酸序列及与其他5SrRNA的比较
5S rRNA 同源性 碱基替换率
2007/12/21
摘要 蜜蜂5SrRNA由119个核苷酸组成。与其他几种昆虫的5SrRNA比较,其序列的同源性在80％以上,具有较高的保守性。在二级结构的模式基础上,证明了单链突环区比双链螺旋区保守的现象;通过计算5SrRNA每年每个核苷酸位点上的碱基平均替换率,揭示了昆虫5SrRNA比脊椎动物的5SrRNA有较高的替换速率,其主要原因是双链螺旋区碱基高替换所致;并提出了用比较较保守的单链压的方法,修正计算碱基替换...
摘要 基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(polyAanchoredRNAaccessiblesitesscreening)方法,即通过在mRNA末端引入polyA,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3’末端得到固定,保持mRNA的自然伸展和折叠,与寡核苷酸文库杂交筛选mRNA的结合靶点.PARASS筛选获得了绿色荧光蛋白(GF...
懒猴高重复顺序DNA的核苷酸顺序分析及其与类α-DNA顺序的比较
高重复顺序 类α顺序 分子克隆 序列分析
2007/12/21
摘要 为确知懒猴高重复顺序与灵长类类α顺序间的相互关系,我们将懒猴DNA经EcoRI酶切所得到的高重复顺序DNA的最小片段重组到质粒pUC~(12)上,经转化、筛选、鉴定得到含有懒猴高重复顺序片段的克隆,命名为pLS(EcoR Ⅰ)-1,测定其全部核苷酸顺序为641bp,发现该顺序有与类α顺序的相似性,但变异性较大,我们对此进行了讨论。
摘要 为了探讨 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 化学修饰形式与 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 稳定性，体外细胞毒性以及抗流感病毒活性之间的关系，合成了 ７ 种不同化学修饰形式的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ：硫代 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端分别磷酸化和胆固醇修饰；３′与 ５′端硫代，中间为天然结构的混合骨架 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ；天然结构 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端分别磷酸化和胆固醇修饰等．测定了 ７ 种修...
化学法合成生物素标记寡核苷酸探针
生物素 寡核苷酸
2007/12/21
摘要 生物素可通过氨烷基磷酰胺基团连接到寡核苷酸5'末端,反应在水溶液中进行,核苷酸的侧链基团不用保护。我们以这种化学法合成了生物素标记的寡核苷酸探针,其显色灵敏度达50pg,杂交灵敏度达0.4fmol,并与酶标生物素寡核苷酸探针进行了比较,也对两种不同显色体系作了比较。
摘要 采用RT PCR方法扩增出 4 2 6bp着色性干皮病A(xerodermapigmentosumgroupA ,XPA)cDNA片段 (2～ 4 2 7bp) ,反向插入pcDNA3 1质粒构建XPA反义RNA表达载体 .经测序证实 ,该片段序列与XPAmRNA对应片段完全互补 .通过脂质体Lipofectamine 2 0 0 0将重组质粒转染肺癌A5 4 9细胞 ,RT PCR检测表明...
寡核苷酸芯片技术用于检测过氧化物酶体活化物激活受体基因多态性
过氧化物酶体活化物激活受体 基因多态性 寡核苷酸芯片
2007/12/21
摘要 通过寡核苷酸芯片技术检测PPARα基因Leu162Val、Val227Ala多态性和PPARγ Pro12Ala的基因多态性，建立一种快速、简便、准确的方法，为研究非酒精性脂肪性肝病的发病机制、临床诊断和治疗提供依据.收集人体外周血标本，提取DNA进行PCR扩增，设计相应的探针和引物，制备检测芯片，PCR产物与芯片杂交后，扫描芯片并分析结果.PCR产物进行测序验证.寡核苷酸芯片技术检测PP...
寡聚核苷酸诱导突变法改造φ×174噬菌体A基因蛋白的DNA识别序列
寡聚核苷酸 定点突变 φX174噬菌体A基因蛋白
2007/12/21
摘要 为了进一步研究φX174噬菌体A基因蛋白的复制功能与其所识别的30核苷酸保守序列的关系,我们采用寡聚核苷酸诱导的定点突变法成功地改造了这30核苷酸保守序列。将此保守序列重组到M_(13)mp9噬菌体后,以其单链为模板,在14或16寡聚核苷酸的诱导下,合成共价闭环DNA。经转化到E.coli JM103菌株,用点印迹(Dot blot)杂交法筛选,得到两种重组突变株。一种突变株其30核苷酸保守...
钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶的简易粗提法
2007/12/21
摘要 钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶(camodulindependent cyclic nucleotide phosphodiesterase, CaM-PDE)是研究环核苷酸和钙调素酶法测定必备的工具。由于其稳定性较差,不能长期保存,需经常提取。传统提取方法采用冷室中线性离子梯度DEAE纤维素柱层析与其它层析并用。本法利用DE_(52)柱层析,阶段离子浓度洗脱。纯化CaM-PDE近20倍。...