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【目的】中华蜜蜂Apis cerana cerana气味受体Or10是感受信息素的重要受体蛋白之一。本研究目的是克隆出该受体基因的序列,并分析该基因在雄蜂不同生理状态下触角和大脑中的表达特征,为该基因的功能研究提供理论依据。【方法】采集中华蜜蜂雄蜂触角,提取其总RNA,采用RT-PCR技术克隆中华蜜蜂Or10基因的序列。利用生物信息学软件分析该基因的氨基酸序列。通过荧光定量PCR技术(qPCR)分...
【目的】过氧化氢酶(CAT)的主要功能是将过氧化氢分解成水和氧气,从而使生物免受氧化损伤的伤害。本研究旨在探索CAT在粘虫Mythimna separata抗氧化胁迫中的作用。【方法】采用RT-PCR和RACE技术克隆粘虫CAT基因的cDNA全长序列和基因组序列,利用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白质的序列特性;运用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析该基因在不同发育阶段(卵、1-6龄幼虫、...
【目的】海藻糖酶(trehalase, Tre)作为昆虫体内海藻糖代谢的关键性酶,在昆虫能量调节和生长发育中具有重要作用。本研究旨在克隆获得沙葱萤叶甲Galeruca daurica海藻糖酶基因,并对其表达模式进行定量分析,以期探究海藻糖酶在沙葱萤叶甲生长发育和成虫夏滞育中的作用。【方法】根据沙葱萤叶甲转录组数据,采用RACE技术,克隆得到Tre基因的cDNA全长,并进行生物信息学分析;应用实时荧...
谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)是植物氮素同化过程中的限速酶。本试验选取茶树(Camellia sinensis) ‘龙井43’为材料, 利用RACE法克隆得到3个茶树CsGS1s基因成员。序列分析显示CsGS1.1、CsGS1.2和CsGS1.3基因全长分别为1 634、1 482和1 398 bp, 其开放阅读框长度均为1 071 bp, 编码356个氨基酸;...
以‘富士’和‘嘎啦’苹果(Malus pumila)叶片总RNA为模板, 利用反转录PCR (RT-PCR)技术, 克隆N-乙酰基-5-羟色胺-O-甲基转移酶(ASMT)基因, 通过DNAMAN、MEGA 5.1、ProtParam等生物信息学软件对基因cDNA序列、系统进化关系、理化性质等进行分析, 将克隆的苹果ASMT基因与表达载体pET32a连接, 构建原核表达载体并转入大肠杆菌(Esche...
二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)是花青素合成途径中的关键酶。本研究以乌头(Aconitum carmichaeli)不同开放时期的花蕾为材料, 测定其花青素含量, 并采用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)技术从乌头花中获得了DFR基因cDNA全长, 命名为AcDFR (GenBank登录号KY272864)。结果显示, 乌头花青素含量随着花的开放呈先上升后下降的趋势。AcDFR的cDNA全长...
【目的】 RBP1是一种参与黑腹果蝇Drosophila melanogaster性别决定基因doublesex(dsx)pre-mRNA选择性剪接的重要剪接因子。本研究旨在克隆RBP1基因在西方蜜蜂Apis mellifera中的同源基因AmRBP1,分析其结构域及其在西方蜜蜂性别决定初期胚胎和幼虫不同发育阶段中的表达模式,以期为研究该基因是否参与蜜蜂性别决定奠定基础。【方法】基于NCBI中提交...
细胞质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因SOS1在植物拒盐过程中发挥着十分重要的作用。本文以耐盐苦荞麦(Fagopyrum tataricum)品种‘川荞1号’及其新株系川荞1号-1为实验材料, 利用cDNA末端快速扩增(RACE)法获得苦荞麦SOS1基因, 命名为FtSOS1, 并在GenBank中注册, 登记号为KY659584。序列分析表明, 该基因全长3 873 bp, 开放阅读框3 396 ...
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是影响全球养猪业的一种重要病原。近年来,国内新出现的类NADC30毒株导致临床PRRS疫情再次出现。本研究旨在构建PRRSV类NADC30毒株CHsx1401的感染性克隆,以期为研究该类毒株遗传变异与演化以及与其他毒株致病性差异的分子机制奠定基础。将类NADC30毒株CHsx1401全长基因组分为4个片段进行RT-PCR扩增,分别将扩增片段克隆到pJET1.2载...
为分析并预测斯氏副柔线虫免疫相关基因CTPK编码蛋白结构、功能以及其作为疫苗候选抗原的可能性,通过提取斯氏副柔线虫组织RNA,反转录合成cDNA,设计特异性引物以扩增CTPK基因的CDS区,并利用生物信息学软件对CTPK进行蛋白质结构分析和抗原表位预测。生物信息学分析表明,CTPK基因cDNA序列全长共519 bp,具有完整的开放阅读框(519 bp),编码173个氨基酸,相对分子质量和等电点大小...
胚胎发育晚期丰富(LEA)蛋白在植物抵抗非生物胁迫过程中起着重要作用。利用RACE技术从柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)中克隆得到一个LEA_4家族基因CkLEA4-2, 其cDNA全长963 bp, 编码240个氨基酸。实时荧光定量PCR检测发现CkLEA4-2的表达受干旱、脱水、NaCl、冷、高pH、脱落酸(ABA)处理的诱导。通过构建35S启动子驱动的pCanG-Ck-...
【目的】海藻糖合成酶(trealose-6-phosphate synthase, TPS)是海藻糖合成过程中的关键酶之一。本研究旨在克隆沙葱萤叶甲Galeruca daurica海藻糖合成酶基因,分析其对不同温度胁迫的响应,以期进一步揭示沙葱萤叶甲耐温性的分子调控机制。【方法】通过RACE技术克隆沙葱萤叶甲TPS基因的全长cDNA序列,并对该基因进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR方法检测...
休眠相关MADS-box (DAM)基因在植物芽休眠及解除过程中发挥重要作用。本研究以‘蓝丰’蓝莓(Vaccinium corymbosum)休眠花芽为材料, 利用RT-PCR及RACE技术, 克隆获得VcDAM1基因(GenBank登录号为KF871069)。该基因全长1 376 bp, 包含一个750 bp的开放阅读框, 编码249个氨基酸。序列比对发现, 该基因编码的蛋白质具有典型的MIKC...
【目的】克隆和鉴定光肩星天牛Anoplophora glabripennis气味结合蛋白(odorant binding proteins, OBPs)基因,明确其表达特点及与寄主植物挥发物的结合特性,有助于阐明光肩星天牛嗅觉识别的分子机制。【方法】根据光肩星天牛雌成虫触角转录组数据,利用RT-PCR克隆OBP12基因,并进行生物信息学分析。通过实时定量PCR(qRT-PCR)测定OBP12在光肩...
茶树作为一种叶用植物, 具有重要的经济价值。非生物胁迫对茶树的生长发育过程和茶叶的生产影响很大。本研究采用RT-PCR方法从茶树‘龙井43’ cDNA中克隆获得1个编码HD-Zip转录因子的基因CsHB1。序列分析显示, CsHB1基因cDNA长为1 380 bp, 编码459个氨基酸, 含有典型的START结构域。进化分析显示, 茶树CsHB1属于HD-Zip家族转录因子的IV亚族。多序列对比发...

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